[发明专利]一种用于甜瓜杂交种黄金蜜25纯度鉴定的SSR引物及方法

说明书

本发明公开了一种用于甜瓜杂交种黄金蜜25纯度鉴定的SSR引物，所述SSR引物包括引物对gSSR15606和/或引物对gSSR45335；所述SSR引物均能够在黄金蜜25父母本中产生特异性标记，特异性强。本发明还提供一种用于鉴定甜瓜杂交种黄金蜜25纯度的方法，该方法利用上述SSR引物，能快速、准确、高效的鉴定甜瓜瓜杂交种子纯度；通过本发明引物及方法，只需简单提取甜瓜叶片基因组DNA，然后进行PCR扩增及电泳，即可有效的鉴定甜瓜杂交种子的纯度。本发明的方法在5h内即可完成杂交种子纯度鉴定工作，具有快速、准确、低成本、操作方便等优势，能够代替传统杂交种子纯度鉴定的方法，具有较高的商业应用价值。

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，具体涉及一种用于甜瓜杂交种黄金蜜25纯度鉴定的SSR引物及方法。

背景技术

甜瓜是葫芦科（Cucurbitaceae)）甜瓜属（ Cucumis）异化授粉作物，是世界上重要的果用蔬菜作物，全球十大水果之一。甜瓜具有较强的杂种优势，且一代杂交种具有长势强、抗病性好、产量高、品质好等优点，近年来甜瓜生产绝大部分商品种子使用的是杂交种。由于大部分杂交种是人工制种，纯度难以控制，如果去雄不及时、不彻底，就极易产生假杂种，造成杂交种子纯度降低，达不到种子质量标准，降低作物产量和品质。

甜瓜杂交种子纯度鉴定传统方法是田间形态学鉴定，但此方法鉴定周期长、工作量大、需要耗费大量的人力物力、受季节影响，可利用的形态性状有限，且易受环境条件影响导致鉴定结果不准确，此外，北方大部分地区因气候原因来不及做出田间纯度鉴定，不能满足当年生产需要。因此，建成一套快速、准确、高效鉴定甜瓜杂交种子遗传纯度的方法，对提高甜瓜种子质量管理是十分必要的。

发明内容

本发明针对目前甜瓜杂交种子纯度鉴定大多靠田间形态学鉴定方法存在受季节限制大、鉴定周期长等缺陷，本发明的第一个目的在于提供2对用于鉴定甜瓜新品种黄金蜜25杂交种子纯度的SSR 引物，这两对引物均能够在黄金蜜25父母本中产生特异性标记，特异性强。本发明的目的还在于提供一种用于鉴定甜瓜杂交种子黄金蜜25纯度的方法，该方法利用上述SSR 引物，能快速、准确、高效的鉴定甜瓜瓜杂交种子纯度。

本发明所采用的技术方案是：

本发明所提供的用于甜瓜杂交种黄金蜜25种子纯度鉴定的SSR引物，包括2对SSR引物对序列，分别用这2对引物中任意1对或2对同时应用均可鉴定甜瓜杂交种黄金蜜25的种子纯度。上述引物的具体核苷酸序列如下：

引物对1：

上游引物gSSR15606-F：5'- TCTGTTTGTACCACCAAAATC-3' (SEQ ID NO.1)

下游引物gSSR15606-R：5'- TCCTCCTCTTCTTTTACCAAT-3' (SEQ ID NO.2)

引物对2：

上游引物gSSR45335-F：5'- TGGAATTAAATGTGGACAATG-3' (SEQ ID NO.3)

下游引物gSSR45335-R：5'- GTCCACCGTAAAAAGAGTTTC-3' (SEQ ID NO.4)

本发明还提供一种利用上述引物对进行甜瓜杂交种子纯度鉴定的方法，具体包括以下步骤：

(1)提取甜瓜杂交种F1及其对应亲本叶片基因组DNA；

(2)以提取的基因组DNA为模板，利用上述2对引物中任意1~2对引物进行PCR扩增；

(3)对步骤(2)的PCR扩增产物进行8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；