[发明专利]一种用于甜瓜杂交种黄金蜜25纯度鉴定的SSR引物及方法在审
| 申请号： | 201810785348.4 | 申请日： | 2018-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN109439783A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 阿门;卢霞;滕录华;邓志军;林爱华;樊文义;司龙亭 | 申请（专利权）人： | 江苏绿港现代农业发展有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 宿迁市永泰睿博知识产权代理事务所(普通合伙) 32264 | 代理人： | 陈臣 |
| 地址： | 223800 江苏省宿迁*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甜瓜杂交种 甜瓜 引物 杂交种子纯度 纯度鉴定 种子纯度鉴定 特异性标记 叶片基因组 电泳 传统杂交 商业应用 特异性强 杂交种子 低成本 父母本 | ||
1.一种用于甜瓜杂交种黄金蜜25纯度鉴定的SSR引物，其特征在于：所述SSR引物包括引物对gSSR15606和/或引物对gSSR45335；引物对gSSR15606的上游引物gSSR15606-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，引物对gSSR15606的下游引物gSSR15606-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;引物对gSSR45335的上游引物gSSR45335-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，引物对gSSR45335的下游引物gSSR45335-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.一种利用权利要求1所述的SSR引物进行甜瓜杂交种黄金蜜25纯度鉴定的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)提取甜瓜杂交种F1及其对应亲本叶片基因组DNA；
(2)以提取的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的SSR引物进行PCR扩增；
(3)对步骤(2)的PCR扩增产物进行8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；
(4) 对步骤(3)电泳检测结果进行分析：甜瓜真正杂交种的标准图谱为同时具有父母本特异性条带的电泳图谱，否则为假杂种，利用条带统计结果计算杂交种子纯度；
若步骤（2）中选用引物对gSSR15606，步骤(4)中能检测出142bp的母本特异性条带、其核苷酸序列表如SEQ ID NO.5所示，及163bp的父本特异性条带、其核苷酸序列表如SEQ IDNO.6，则为甜瓜真正杂交种，否则为假杂种；
若步骤（2）中选用引物对 gSSR45335，步骤(4)中能检测出146bp的母本特异性条带、其核苷酸序列表如SEQ ID NO.7所示，及156bp的父本特异性条带、其核苷酸序列表如SEQ IDNO.8所示，则为甜瓜真正杂交种，否则为假杂种；
若步骤（2）中同时选用引物对 gSSR45335和引物对 gSSR45335，步骤(4)中能检测出142bp的母本特异性条带、其核苷酸序列表如SEQ ID NO.5所示，及163bp的父本特异性条带、其核苷酸序列表如SEQ ID NO.6，步骤(4)中还能检测出146bp的母本特异性条带、其核苷酸序列表如SEQ ID NO.7所示，及156bp的父本特异性条带，其核苷酸序列表如SEQ IDNO.8所示，则为甜瓜真正杂交种，否则为假杂种。
3.根据权利2所述的方法，其特征在于：
所述步骤(2) 中PCR 扩增时采用的反应体系为：15µl的体系，包括7.5µl 2*TaqMasterMix，10mM的正反引物各1µl，1µl的甜瓜DNA为模板， 4.5µl灭菌的超纯水；
所述步骤(2) 中PCR 扩增时扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，循环35次；最后延伸2min，16℃终止PCR反应；
所述步骤(3)中电泳检测时，采用银染法染色，白光下拍照记录特征条带。
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