[发明专利]一种用于鉴别脓肿分枝杆菌和马赛分枝杆菌的引物探针组合

说明书

本发明公开了一种鉴别脓肿分枝杆菌和马赛分枝杆菌的引物探针组合。本发明提供的引物探针组合由序列表的序列1‑序列4所示的单链DNA组成。本发明提供一种脓肿分枝杆菌和马赛分枝杆菌鉴定方法，从分子水平快速完成对脓肿分枝杆菌和马赛分枝杆菌的区分，具有简便、快速、高特异性和高灵敏性的特点，从而解决了现有分子技术无法准确、快速鉴定脓肿分枝杆菌复合群的特点。

技术领域

本发明涉及一种鉴别脓肿分枝杆菌和马赛分枝杆菌的引物探针组合。

背景技术

非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)是指除及麻风分枝杆菌以外的所有分枝杆菌菌种。NTM广泛存在于自然环境中的水、土壤和气溶胶中，大部分为腐物寄生菌，仅少部分对人体致病。近年来的流行病学分析表明，全球NTM病的发病率呈增多趋势，甚至是一些以前被认为是非致病性的NTM,也有致病的报道。我国历次结核病流行病学调查资料显示，NTM分离率从1990年的4.9％升至2000年的11.1％，2010年进一步增加至22.9％，该结果暗示我国NTM呈明显上升的态势。对于NTM病发病率增加的原因，可能与免疫力低下人群增多、环境暴露増加、以及人口老龄化有关，如何面对分枝杆菌病新的挑战，是人类目前面临的严峻课题。所有致病性NTM中最常见是属于脓肿分枝杆菌复合群和鸟胞内分枝杆菌复合群。

脓肿分枝杆菌复合群对一线抗结核药物天然耐药，对普通抗菌药物也大多无效，治疗方案通常是以克拉霉素等大环内酯类抗生素为核心的多药联合方案，治愈率仅有约60％，因此是NTM病是治疗的重点和难点。致病性脓肿分枝杆菌复合群主要包括脓肿分枝杆菌和马赛分枝杆菌，尽管在生物学方面表现出很强的相似性，但是两种菌种对克拉霉素不同的耐药特性，因此，早期完成对两种分枝杆菌的鉴定和克拉霉素的耐药性分析对于提高非结核分枝杆菌的治愈率有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴别脓肿分枝杆菌和马赛分枝杆菌的引物探针组合。

本发明提供了引物探针组合，由引物F1、引物R1、探针P1和探针P2组成；

所述引物F1为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物R1为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述探针P1为如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；

所述探针P2为如下(a7)或(a8)：

(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。

所述探针P1由荧光基团甲和淬灭基团修饰；

所述探针P2由荧光基团乙和淬灭基团修饰；

荧光基团甲和荧光基团乙为不同的荧光基团。

荧光基团甲为FAM荧光基团；

荧光基团乙为HEX荧光基团。

所述淬灭基团为BHQ1淬灭基团。