[发明专利]一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，属于生物检测技术领域，该试剂盒包含试剂R1和试剂R2，试剂R1包含以下浓度的组分：缓冲液50～300mmoL/L、无机盐5～50g/L、促聚剂1～20g/L、防腐剂0.05～2g/L，试剂R2包含以下浓度的组分：缓冲液50～300mmoL/L、稳定剂10～160g/L、表面活性剂10～200g/L、封闭剂5～50g/L、包被抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.04～0.20g/L、防腐剂0.05～2g/L；稳定剂至少为甘油、蔗糖、海藻糖、乙二胺四乙酸二钠中的一种。本发明试剂盒具有灵敏度高、精密度高、试剂稳定等优点。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒。

背景技术

脂蛋白磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2)又称为血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)，是磷脂酶超家族中独特的一组，具有明显的底物选择性和不需要Ca²⁺维持其活性的特点，其受生理变异很小，基本不受体位改变和日常活动的影响。Lp-PLA2由血管内膜中的巨噬细胞、T细胞和肥大细胞分泌，并受炎性介质的调节。Lp-PLA2可水解氧化低密度脂蛋白ox-LDL中的氧化磷脂，生成脂类促炎物质(如溶血卵磷脂和氧化游离脂肪酸)，进而产生多种致动脉粥样硬化(如内皮细胞死亡、内皮功能异常，刺激粘附因子和细胞因子的产生)。因此，Lp-PLA2具有很强的促炎症和促动脉粥样化的作用，是一种新的血管炎症高特异性标志物，是冠心病和缺血性卒中的独立危险因素。

目前现有技术中，Lp-PLA2的检测方法包括酶活力测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫分析试纸条检测和胶乳免疫比浊法等。在酶活力测定中，其是根据酶促反应原理，测定血清中Lp-PLA2的活力，该方法易受底物浓度、反应温度、pH、时间等多种因素的干扰；在酶联免疫吸附测定中，其检测灵敏度高但操作过程略显复杂，测定时间较长，影响因素多，且不适合急诊样本的检测；在免疫分析试纸条测定中，其主要采用胶体金免疫层析法或荧光免疫层析法的原理，操作简单、方便快捷，但灵敏度较低，准确性低易出现漏检情况，且自动化程度不高且不利于大批量临床检测。

随着检测技术的快速发展，Lp-PLA2已实现了全自动化检测，Lp-PLA2检测试剂盒被开发并得到广泛的应用。现有以胶乳免疫比浊法制备的试剂盒存在一些不足：稳定性较差、灵敏度差。因此，有必要设计出一种新型的检测试剂盒，该试剂盒检测的稳定性较好、灵敏度高。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，其具有稳定性较好、灵敏度高的优点。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种用于检测脂蛋白磷脂酶A2的试剂盒，其包含试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包含以下浓度的组分：缓冲液50～300mmoL/L、无机盐5～50g/L、促聚剂1～20g/L、防腐剂0.05～2g/L，试剂R1中组分浓度为组分在试剂R1中最终浓度；所述试剂R2包含以下浓度的组分：缓冲液50～300mmoL/L、稳定剂10～160g/L、表面活性剂10～200g/L、封闭剂5～50g/L、包被抗脂蛋白磷脂酶A2抗体的胶乳颗粒0.04～0.20g/L、防腐剂0.05～2g/L，试剂R2中组分浓度为组分在试剂R2中最终浓度；所述稳定剂至少为甘油、蔗糖、海藻糖、乙二胺四乙酸二钠中的一种。

在本发明的试剂R2中加入稳定剂，当稳定剂为甘油、蔗糖、海藻糖或乙二胺四乙酸二钠时，可以提高样本检测的稳定性和灵敏度；适量的稳定剂可以在取得较好的效果前提下减少稳定剂的用量。试剂R1中添加适量的促聚剂，避免了因聚合物过多造成的非特异性反应和因聚合物太少导致的灵敏度过低，合适的聚合物用量有利于提高灵敏度和特异性。试剂R2中添加适量的表面活性剂，有效提高了检测的精密度。