[发明专利]肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00671的应用、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及一种肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00671的应用、试剂盒及检测方法，通过实时荧光定量PCR与生存曲线分析发现肾癌组织来源的非编码RNA LINC00671与患者的生存率相关，含量越高生存率越高，此法为预测肾癌患者的预后生存期分析提供了强有力的技术支持，有助于提高肾癌患者的术后生活质量，制订术后治疗方案，提高生存率，具有深远的临床意义。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00671的应用、试剂盒及检测方法。

背景技术

肾癌是来源于肾实质泌尿小管上皮系统的恶性肿瘤，是泌尿系统的常见病和高发病，在人类恶性肿瘤中肾癌的发病率占有很高的比重，约占成人恶性肿瘤的2％～3％，占成人肾脏恶性肿瘤的80％～90％。肾脏丰富的血供决定了肾癌的早期高转移性，约25％的肾癌病人存在肿瘤转移，很大一部分患者在初诊时即发现肿瘤转移，统计资料显示，死于肾癌的患者数目逐年增加。故而晚期肾癌的治疗对于患者的预后及生存质量提高均具有重要意义。目前，临床上还没有理想的分子指标来评估预后及发生转移的风险。因此，寻找新的预后生物标志物是目前急需解决的问题。

分子生物学的中心法则表明，蛋白质在各种细胞和生物体中起着结构、功能和调节作用。近期在转录组中的研究表明，已知的编码基因只占哺乳动物基因组的5到10％，大量的转录组不编码蛋白质。这些不能编码蛋白质的转录本被称为非编码RNA。非编码RNA一般可以根据其转录本的长度分为两类，一类是转录本长度小于200bp的小分子非编码RNA，如核糖体RNA，小干扰RNA，小RNA和与piwi蛋白相互作用的RNA；另一类是其转录本长度大于200bp的长链非编码RNA。以前，长链非编码RNA经常被认为是基因组中的“噪音”。但越来越多的证据显示，长链非编码RNA在机体中发挥多种重要的生物学功能，例如体内分泌系统、免疫、造血、心脏发育以及肿瘤发生发展等过程。LINC00671是一种新发现的非编码RNA，其转录本长度大于 200个核苷酸。目前，LINC00671在正常细胞发育或肿瘤发生发展的过程中发挥的重要作用还在进一步研究中。LINC00671是否可以作为一种新的肿瘤标志物用于预测肾癌患者预后尚未有报道。因此，我们首次阐明了以LINC00671为新的肾癌标志物来预测患者预后的可行性。

发明内容

本发明的目的是提供一种肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00671的应用，其次，本发明提供一种检测标志物非编码RNA LINC00671在肾癌组织中表达量的试剂盒及检测方法。

本发明的目的是这样实现的：

肾癌预后新型分子标志物非编码RNA LINC00671在制备预测肾癌患者预后的制剂的应用，该非编码RNA LINC00671的核酸序列如SEQ NO:1所示。

所述的用于预测肾癌患者预后的制剂为实时荧光定量PCR检测试剂盒。

试剂盒包括用于检测非编码RNA LINC00671表达的特异性引物，所述特异性引物的核酸序列为SEQ NO:2和SEQ NO:3，以及内参基因TUBA1A表达的引物序列，所述引物的核酸序列为SEQ NO:4和SEQ NO:5。

试剂盒还含有从组织中提取RNA并进行逆转录及实时荧光定量PCR的所有试剂，包括(1)从肾癌的肿瘤或正常对照组织中抽提总RNA所用试剂，包括Trizol液、氯仿、异丙醇、抑制RNA降解溶剂、75％乙醇，DEPC水；(2)以总RNA为模板将非编码RNA LINC00671逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录反应缓冲液、含有含Mg2+的三磷酸碱基脱氧核苷酸dNTP、逆转录酶M-MLV以及随机引物和Oligo dT引物的混合物；(3)将cDNA实时荧光定量PCR所用试剂，包括LINC00671实时荧光定量PCR特异性引物、TUBA1A内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无RNA酶的水。