[发明专利]一种转基因阳性组织的筛选方法在审
| 申请号： | 201810733940.X | 申请日： | 2018-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN108998468A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 张国栋;刘佳音;米铁柱;万吉丽;李继明;葛序娟 | 申请（专利权）人： | 青岛袁策集团有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京华仁联合知识产权代理有限公司 11588 | 代理人： | 李冰 |
| 地址： | 266000 山东省青岛市李*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转基因 双元载体 阳性组织 工程菌 启动子 筛选 报告基因检测 转化植物细胞 植物转基因 酶切位点 融合质粒 阳性植株 愈伤组织 基因 高效率 农杆菌 介导 水稻 引入 观察 申请 转化 成功 | ||
1.一种转基因阳性组织的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
第一步，以含有DsRED片段的质粒为模板，利用引物进行扩增，获得DsRED片段；
第二步，以双元载体质粒为模板，扩增获得两端含有Kpn I和X ba I酶切位点的启动子片段；
第三步，将引入X ba I和BamH I酶切位点的DsRED片段插入到所述双元载体上；
第四步，将引入Kpn I和X ba I酶切位点的启动子连接到第三步已经连接上DsRED基因的双元载体上；
第五步，将含有所述启动子和DsRED基因的双元载体的融合质粒导入到农杆菌中，形成可以用于介导转化植物细胞的工程菌；
第六步，利用上述工程菌转化水稻的愈伤组织；
第七步，通过对第六步中转化的愈伤组织培养后，筛选转基因成功的细胞。
2.根据权利要求1所述转基因阳性组织的筛选方法，其特征在于，所述方法进一步包括：
第八步，将诱导出的再生苗进行检测。
3.根据权利要求2所述转基因阳性组织的筛选方法，其特征在于，所述方法进一步包括：
第八步，将诱导出的再生苗通过利用红色荧光扩增和照射进行检测，检测阳性苗和假阳性苗。
4.根据权利要求1所述转基因阳性组织的筛选方法，其特征在于，所述第三步，进一步包括：将引入X ba I和BamH I酶切位点的DsRED片段插入到pCAMBIA1300双元载体上。
5.根据权利要求1所述转基因阳性组织的筛选方法，其特征在于，所述第三步中，连接体系进一步包括：
16℃条件下连个过夜。
6.一种转基因阳性组织的筛选中使用的将酶切位点的基因片段插入到双元载体上的连接体系，其特征在于，所述连接体系包括：
16℃条件下连个过夜。
7.如权利要求1～5中任一项所述转基因阳性组织的筛选方法在水稻转基因工程中的应用。
8.如权利要求1～5中任一项所述转基因阳性组织的筛选方法筛选的植物转基因阳性组织。
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