[发明专利]一种基于TWS119的NK细胞培养方法

说明书

本发明提供了一种基于TWS119的NK细胞培养方法，包括：取静脉血，制备混合补体；对所述混合补体进行分离，得到所述混合补体中的单个核细胞；取单个核细胞与TWS119进行共培养，得到共培养液；对所述共培养液进行细胞重悬，并加入TWS119进行二次培养，即得到NK细胞。本发明在培养过程中，加入了TWS119进行诱导，提高了NK细胞的增殖率和纯度。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体而言，涉及一种基于TWS119的NK细胞培养方法。

背景技术

自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)是机体重要的免疫细胞，主要分布于外周血中，占PBMC的5％-10％，淋巴结和骨髓中也有NK活性，但水平较外周血低。

NK细胞是一群异质性、多功能的免疫细胞，是人类的众多免疫细胞中的一种，表现为自然细胞毒活性的杀伤细胞。主要作用消灭攻击人类身体的病毒、细菌、癌细胞等。发挥作用的方式分为：直接杀伤、释放穿孔素、NK细胞毒因子和TNF等。每个人的身体里至少有50亿个NK细胞，多则达到1000亿个。但NK细胞的数量和其活动力不是成正比的。即使NK细胞显示有足够的数量，但是不激活他们，他们的工作效率也是非常低的。

目前，国内外已经有大量的研究者进行了人NK细胞的培养和生物治疗方面的研究，但多数研究都是单纯利用IL-2和IL-12等白介素类细胞因子去培养，但是这样获得的结果往往有两个弊端，要么是数量上不去，达不到治疗性回输所需的量，要么是纯度上不去，达不到应有的效果。因为白介素类细胞因子都不是强烈的NK细胞活化剂，缺乏强有力的活化作用。但是，当NK细胞被充分活化后，白介素类细胞因子对NK细胞的活性维持和增殖发挥了极为重要的作用。因此，获得高数量高纯度的NK细胞，首先需要充分活化NK细胞。外周造血干细胞移植已成为治疗恶性血液病、淋巴瘤和乳腺瘤等实体瘤的有效方法，尤其多用在多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤和乳腺癌等实体瘤的治疗。1990年以来，自体造血干细胞移植的数量已超过异基因移植。1993年以后，自体外周血干细胞移植的数量又超过了自体骨髓移植。1990～1994年，用于淋巴瘤和乳腺癌患者的自体造血干细胞移植增加了5倍，同期外周血干细胞移植的百分比也由15％增至75％，成为造血干细胞的主要来源，异基因PBSCT病例迅速增加。我国自1995年异体PBSCT成功以采，发展也极为迅速。

但是常规的制备NK细胞的方法存在所获得的NK细胞纯度偏低，产量不高，增殖率低。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的缺陷，提供了一种基于TWS119的NK细胞培养方法，包括：

取静脉血，制备混合补体；

对所述混合补体进行分离，得到所述混合补体中的单个核细胞；

取单个核细胞与TWS119进行共培养，得到共培养液；

对所述共培养液进行细胞重悬，并加入TWS119进行二次培养，即得到NK细胞。

优选地，所述“取静脉血，制备混合补体”，包括：

采集肝素抗凝的静脉血；

向两个50mL的离心管中加入15mL的淋巴细胞分离液，并贴壁缓慢加入30mL的所述静脉血，离心得离心液；

对所述离心液取其上层血浆，即得到所述混合补体。

优选地，离心液的离心条件为，转速400-800g，离心20分钟。

优选地，所述“对所述离心液取其上层血浆，即得到所述混合补体”之后，还包括：

对所述混合补体进行灭活；其中，灭活过程包括：

取所述混合补体至于50mL离心管中；

56℃加热25分钟，即充分灭活所述混合补体。