[发明专利]一种基于TWS119的NK细胞培养方法

权利要求书

1.一种基于TWS119的NK细胞培养方法，其特征在于，包括：

取静脉血，制备混合补体；

对所述混合补体进行分离，得到所述混合补体中的单个核细胞；

取单个核细胞与TWS119进行共培养，得到共培养液；

对所述共培养液进行细胞重悬，并加入TWS119进行二次培养，即得到NK细胞。

2.如权利要求1所述基于TWS119的NK细胞培养方法，其特征在于，所述“取静脉血，制备混合补体”，包括：

采集肝素抗凝的静脉血；

向两个50mL的离心管中加入15mL的淋巴细胞分离液，并贴壁缓慢加入30mL的所述静脉血，离心得离心液；

对所述离心液取其上层血浆，即得到所述混合补体。

3.如权利要求2所述基于TWS119的NK细胞培养方法，其特征在于，离心液的离心条件为，转速400-800g，离心20分钟。

4.如权利要求2所述基于TWS119的NK细胞培养方法，其特征在于，所述“对所述离心液取其上层血浆，即得到所述混合补体”之后，还包括：

对所述混合补体进行灭活；其中，灭活过程包括：

取所述混合补体至于50mL离心管中；

56℃加热25分钟，即充分灭活所述混合补体。

5.如权利要求1所述基于TWS119的NK细胞培养方法，其特征在于，所述“对所述混合补体进行分离，得到所述混合补体中的单个核细胞”包括：

提取出所述混合补体的单个核细胞层；

用0.01M的PBS洗涤3次，即得到所述混合补体中的单个核细胞；其中，用0.01M的PBS洗涤3次包括：

加入0.01M的PBS进行吹打洗涤，并在200g的转速条件下离心5分钟，重复3次。

6.如权利要求1所述基于TWS119的NK细胞培养方法，其特征在于，所述“取单个核细胞与TWS119进行共培养，得到共培养液”包括：

取预设数量的单个核细胞培养在RPMI1640培养液中，加入10％的人血清，得到血清培养液；

在所述血清培养液中加入K562滋养细胞、白介素2，以及TWS119，每2-3天补液一次，培养7天即得到所述共培养液。

7.如权利要求6所述基于TWS119的NK细胞培养方法，其特征在于，

所述预设数量为三千万个；

所述滋养细胞的加入数量为一亿个；

所述白介素2的加入浓度为50单位/mL；

TWS119的加入浓度为0.5微摩尔/升。

8.如权利要求6所述基于TWS119的NK细胞培养方法，其特征在于，

所述K562滋养细胞，为转染CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137的经过辐照后的K562滋养细胞，辐照条件为100Gy；

所述K562滋养细胞与单个核细胞比例为10:3。

9.如权利要求1所述基于TWS119的NK细胞培养方法，其特征在于，所述“对所述共培养液进行细胞重悬，并加入TWS119进行二次培养，即得到NK细胞”包括：

对所述共培养液进行离心，用RPMI1640培养液重悬；

加入K562滋养细胞四亿和白介素2，以及TWS119，进行二次培养7天，即得到所述NK细胞；其中，

所述K562滋养细胞，为转染CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137的经过辐照后的K562滋养细胞，辐照条件为100Gy；

白介素2的加入浓度为50单位/mL；

TWS119的加入浓度为2微摩尔/L。

10.一种用于制备基于TWS119的NK细胞的试剂盒，其特征在于，其用于实施如权利要求1-9任一项所述基于TWS119的NK细胞的制备方法制备基于TWS119的NK细胞。