[发明专利]一种小鼠单个核细胞分离方法在审
| 申请号： | 201910070514.7 | 申请日： | 2019-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN109666636A | 公开（公告）日： | 2019-04-23 |
| 发明（设计）人： | 丁润中 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海高等研究院;中国科学院大学 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 深圳市科吉华烽知识产权事务所(普通合伙) 44248 | 代理人： | 吴肖敏 |
| 地址： | 201210 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种小鼠单个核细胞分离方法，包括以下操作步骤：采用断颈法处死小鼠，找到脾脏组织转移入细胞培养间；使用pbs缓冲液进行清洗脾脏组织，向细胞培养皿内加入适量RPMI培养基，将脾脏放入细胞滤网中央；用活塞轻压研磨脾脏使脾脏细胞分离下来，用移液器将细胞悬液转移至新的离心管内，将细胞悬液200xg离心5min，吸去上清液；然后加入6ml红细胞裂解液重悬细胞，放于冰上孵育10min；孵育结束后加入20mlPBS缓冲液重悬，200xg离心55min后吸去上清液，使用用适量的加入10％FBS的RPMI培养基重悬，使用RPMI培养基采用1：100比例进行稀释，再取稀释后悬液10ul滴加到血球计数板上计数。本发明操作简单，省时省力，且不需要特殊装置，所提取的细胞悬液中核细胞含量较多，纯度较高。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞悬液 小鼠 单个核细胞 脾脏组织 脾脏 上清液 稀释 重悬 细胞培养 红细胞裂解液 细胞培养皿 血球计数板 活塞 冰上孵育 缓冲液重 脾脏细胞 细胞滤网 研磨 核细胞 离心管 移液器 滴加 断颈 放入 孵育 后悬 轻压 省力 省时 清洗 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种小鼠单个核细胞分离方法，其特征在于：包括以下操作步骤：S1：获取小鼠脾脏组织：预先准备好通过高压灭菌处理的手术器械，采用断颈法处死小鼠，然后分别剪开小鼠右下腹部的皮肤和粘膜，找到脾脏组织，小心取出放入离心管内，转移入细胞培养间；S2：清洗脾脏：将S1)中所得的脾脏组织放入容器中，使用pbs缓冲液进行清洗，同时准备RPMI培养基；S3：制备细胞悬液：将细胞滤网放在细胞培养皿内，然后向细胞培养皿内加入适量RPMI培养基，将脾脏放入细胞滤网中央；将一次性注射器的活塞抽出，用活塞轻压研磨脾脏使脾脏细胞分离下来，持续轻压研磨直至无明显脾脏组织残留；用移液器将细胞悬液转移至新的离心管内，并用适量RPMI培养基讲细胞滤网上的残留细胞冲洗下来；最后用新的细胞滤网再次过滤细胞悬液并收集；S4：裂解红细胞：将S3)中得到的细胞悬液200xg离心5min，吸去上清液；然后加入6ml红细胞裂解液重悬细胞，放于冰上孵育10min；孵育结束后加入20mlPBS缓冲液重悬，200xg离心55min后吸去上清液，使用用适量的加入10％FBS的RPMI培养基重悬，得到单个核细胞细胞悬液；S5：细胞计数与培养：取10ulS4)中得到的单个核细胞悬液，使用RPMI培养基采用1：100比例进行稀释；再取稀释后悬液10ul滴加到血球计数板上计数。根据计数结果算出所得单个核细胞悬液的细胞密度，将其调整为需要的细胞密度并用含10％FBS的RPMI培养基培养。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国科学院上海高等研究院;中国科学院大学，未经中国科学院上海高等研究院;中国科学院大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910070514.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 一种免疫细胞复苏培养液及其制备方法-201910641433.8
- 徐智峰;张新;黄智斌;洪加津;陈海明 - 广州沙艾生物科技有限公司
- 2019-07-16 - 2019-11-12 - C12N5/078
- 本发明提供一种免疫细胞复苏培养液，包括氨基酸、膦酸类化合物、维生素、盐类、蛋白或多肽、酶或辅酶、细胞因子、植物提取物。本发明免疫细胞复苏培养液能够有效保持免疫细胞复苏后的生理功能和生物学特性，可应用于临床治疗；本发明的免疫细胞复苏培养液中不含动物血清，因此不会引入外源蛋白，降低了动物病原污染的可能性，不会对人体过继免疫治疗产生影响；与进口免疫细胞复苏培养液相比，成本低，廉价；与传统的免疫细胞复苏培养液相比，免疫细胞的复苏率高，免疫细胞增殖活性高，可以长时间保存。
- 简易高效的鲟鱼白细胞分离方法-201910744686.8
- 赵振新;杨明举;李道友;赵飞;刘伟;赵凤 - 贵州省水产研究所
- 2019-08-13 - 2019-11-12 - C12N5/078
- 本发明公开了一种简易高效的鲟鱼白细胞分离方法。本发明的操作简单，能一次性分离出大量的白细胞，并且分离出来白细胞的纯度高；克服了现有技术中，鱼类白细胞的分离方法步骤复杂，操作难度高，且单次分离效果不理想，且需要多次富集的问题。因此，本发明能弥补鲟鱼白细胞分离相关研究的空白，为鲟鱼在免疫机能上的研究提供理论支撑。
- 改善神经细胞功能的免疫细胞培养基及其制备方法与应用-201910630756.7
- 古松海;吴茂友;徐道俊;蔡晓晴 - 赛德特生物科技开发有限公司
- 2019-07-12 - 2019-10-25 - C12N5/078
- 本发明提供了一种改善神经细胞功能的免疫细胞培养基及其制备方法与应用。本发明首先提供一种培养基组合物，其可用于免疫细胞NEIC(Nerval Enhancement Immune Cells)的培养，其组分包括：A液和B液；其中，A液组成成分包括：基础培养基、IL‑2、IL‑10、NT3；还可进一步包括IL‑4和/或BDNF；B液组成成分包括：基础培养基、IL‑2、IL‑4、BDNF；还可进一步包括NT3。本发明的培养基用于针对改善、促进神经细胞功能的免疫细胞NEIC的培养，可使免疫细胞的增殖速度更快、BDNT、NT3细胞因子的分泌量更多，用于改善躁郁症症状、焦虑与失眠等亚健康症状。
- 一种预防肿瘤发生的免疫细胞培养基及其制备方法与应用-201910630764.1
- 古松海;吴茂友;张益丽;徐瑞弦 - 赛德特生物科技开发有限公司
- 2019-07-12 - 2019-10-22 - C12N5/078
- 本发明提供了一种预防肿瘤发生的免疫细胞培养基及其制备方法与应用。本发明首先提供一种培养基组合物，其可用于免疫细胞TPKT(Tumor Prevention Killer T Cells)的培养，其组分包括：A液和B液；其中，A液组成成分包括：基础培养基、IL‑2、IFN‑γ、GMCSF；还可进一步包括TNF‑α；B液组成成分包括：基础培养基、IL‑2、IFN‑γ；还可进一步包括IL‑12。本发明的培养基用于针对可识别、清除机体内表达变异蛋白的肿瘤前体细胞及影像学不可见得微小肿瘤的TPKT细胞的培养，可使免疫细胞的增殖速度更快、识别及免疫功能更强。
- 改善、促进神经细胞功能的免疫细胞及其制备方法与应用-201910630201.2
- 古松海;吴茂友;张益丽;徐瑞弦 - 赛德特生物科技开发有限公司
- 2019-07-12 - 2019-10-11 - C12N5/078
- 本发明提供了一种可以改善、促进神经细胞功能的免疫细胞及其制备方法与应用，所述免疫细胞的制备方法包括：体外分离并纯化外周血单个核细胞；用细胞激活因子I激活外周血单个核细胞；其中，细胞激活因子I含有IL‑2、IL‑10、NT3、IL‑4、BDNF，以生理盐水配置；用细胞激活因子II将激活后的细胞进行扩增；其中，细胞激活因子II含有IL‑2、IL‑4、BDNF、NT3，以生理盐水配置；收获免疫细胞。本发明的免疫细胞能够分泌大量NGF、NT3/NT4、BDNF等神经因子，这些神经因子能够促进神经系统的恢复，同时所述免疫细胞还具有和神经细胞类似的神经递质受体能够起到调节神经功能的作用，有效改善躁郁症。
- 改善自身免疫疾病的免疫细胞培养基及其制备方法与应用-201910631730.4
- 古松海;吴茂友;徐道俊;徐瑞弦 - 赛德特生物科技开发有限公司
- 2019-07-12 - 2019-10-08 - C12N5/078
- 本发明提供了一种改善自身免疫疾病的免疫细胞培养基及其制备方法与应用。本发明首先提供一种培养基组合物，其可用于免疫细胞AARI(Autoimmune and Allergy Regulator Immune Cells)的培养，其包括A液和B液；A液包括：基础培养基、IL‑2、IL‑1α、IFN‑γ；还可进一步包括IL‑12；B液包括：基础培养基、IL‑2、IFN‑γ；还可进一步包括IL‑12。本发明的培养基用于针对缓解自身免疫性疾病症状的免疫细胞AARI的培养，可使增殖速度更快、改善自身免疫性疾病症状的功能更强，能缓解过敏性鼻炎、哮喘、花粉过敏及类风湿性关节炎等。
- 有关胚胎移植延迟和使用外周血单核细胞的体外受精方法-201910061947.6
- A·费斯科沃;I·费斯科瓦;I·兹杨科瓦;S·兹尔科沃 - 迈渣德塔医学知识产权控股公司
- 2012-11-21 - 2019-10-01 - C12N5/078
- 一种体外受精的方法，其中在从患者撷取卵子之后至少2个月，并且优选3个月到12个月，将胚胎植入到雌性患者的子宫中，以降低患者的自身免疫系统对胚胎的自身免疫排斥反应的影响，并且增加妊娠的可能性和成功率，并且其中在胚胎植入前，通过将外周血单核细胞(PBMC)引入到子宫中来对子宫中的子宫内膜进行准备以用于胚胎植入。将所述程序与冷冻保存技术相结合以保存患者的卵母细胞或IVF产生的胚胎。
- 一种自发永生化的绵羊外周血来源细胞系及其建立方法-201611022238.X
- 刘贤勇;索勋;刘群;王思;杜孟泽;索静霞;张思新;顾小龙;汤新明 - 中国农业大学
- 2016-11-16 - 2019-09-24 - C12N5/078
- 本发明涉及生物细胞系，具体公开了一种自发永生化的绵羊外周血来源细胞系及其建立方法。具体为，采集成年健康绵羊的外周血，利用人外周血淋巴细胞分离液分离细胞后，进行细胞的培养与传代，传代过程中，通过对消化步骤的优化以及对培养基的优化，获得一种均一性高的自发永生化的绵羊外周血来源细胞系，该细胞系可表达绵羊的多种先天免疫受体，可用于细胞生物学、病原与宿主相互作用的体外研究。为促进绵羊健康养殖及疫病防控提供了很好的细胞学工具，为体外研究病原与绵羊的相互作用、评估药物或生物制品对绵羊的影响，更好的服务绵羊的健康养殖。
- 一种具有促进消化道损伤修复的免疫细胞的制备方法-201910488427.3
- 谢海涛;陈清法;翟秋梅;钟家炜 - 广东先康达生物科技有限公司
- 2019-06-05 - 2019-09-20 - C12N5/078
- 本发明公开了一种具有促进消化道损伤修复的免疫细胞的制备方法，包括如下步骤：从血液中分离出血细胞；将血细胞置于0‑5摄氏度的箱体内培养1‑2小时；将血细胞置于细胞激活培养基中进行血细胞激活培养10‑20小时，以便得到初步扩增的血细胞；将血细胞置于至少一种细胞培养基中加入苦瓜汁和激活试剂进行血细胞培养10‑30小时，以便得到激活的血细胞；将激活的血细胞经过至少一次的生理盐水清洗，从而得到具有促进消化道损伤修复的免疫细胞的制备方法。本发明具有能通过促进消化道损伤修复来治疗各种消化道疾病的优点。
- 一种高效获取小鼠肺脏全免疫细胞的方法-201910551630.0
- 曹红翠;刘景琪;徐燕萍;朱嘉琪;冯冰;冯旭东;俞炯;潘巧玲;李兰娟 - 浙江大学
- 2019-06-24 - 2019-09-20 - C12N5/078
- 本发明涉及动物细胞提取方法，旨在提供一种高效获取小鼠肺脏全免疫细胞的方法。该方法包括：经心脏持续灌流、冲洗小鼠肺脏后，剪碎肺脏进行解离和消化；过滤后多次离心处理，对所得沉淀进行裂解以完全去除红细胞；终止裂红后再次离心处理；弃上清，得到纯净肺脏全免疫细胞。本发明能够在保证细胞纯度的基础上分离出高得率的小鼠肺脏全免疫细胞.与现有技术中研磨法分离的结果相比，本发明分离的小鼠肺脏全免疫细胞得率在大于5×106/只，高于研磨法得率的1～2.5×106/只，且细胞活率大于95％，大于传统研磨法细胞活率约85％。
- 一种高效获取小鼠肝脏全免疫细胞的方法-201910564045.4
- 曹红翠;冯旭东;俞炯;潘巧玲;刘景琪;李兰娟 - 浙江大学
- 2019-06-24 - 2019-09-20 - C12N5/078
- 本发明涉及动物细胞提取方法，旨在提供一种高效获取小鼠肝脏全免疫细胞的方法。提供一种高效获取小鼠肝脏全免疫细胞的方法，包括：对小鼠肝脏静脉灌流、冲洗后，剪碎进行解离和消化；过滤后多次离心处理，对所得沉淀进行裂解以完全去除红细胞；终止裂红后再次离心处理；弃上清，得到纯净肝脏全免疫细胞。本发明能够在保证细胞纯度的基础上尽可能多地去除肝脏实质细胞，分离出高得率的小鼠肝脏全免疫细胞。与现有技术中研磨法分离的结果相比，本发明分离的小鼠肝脏全免疫细胞得率在大于5×106/只，高于研磨法得率的1～2.5×106/只，且细胞活率大于95％，大于传统研磨法细胞活率约85％。
- 孕妇外周血中胎儿游离DNA的保存剂及其构成的真空采血管-201610778832.5
- 韦德 - 成都瑞琦科技实业股份有限公司
- 2016-08-30 - 2019-09-20 - C12N5/078
- 本发明公开了一种孕妇外周血中胎儿游离DNA的保存剂及其构成的真空采血管，解决了目前尚未见成熟的孕妇外周血中游离DNA的体外检测的采集和保存技术，导致现有血浆中胎儿游离DNA保存时间短、易降解的问题。本发明的保存剂包括细胞稳定剂、抗凝剂、缓冲液、代谢抑制剂和DNA酶抑制剂。本发明能稳定母体外周血有核细胞，防止释放细胞染色体DNA，抑制DNA酶介导降解，有助于胎儿游离DNA的整体稳定。
- 一种高纯度的PBMC分离方法-201910674186.1
- 向洋;王金涛 - 上海轩锋生物科技有限公司
- 2019-07-25 - 2019-09-17 - C12N5/078
- 本发明提供了一种高纯度的PBMC分离方法，包括以下步骤：将采集的全血离心10min；吸取上层的血浆离心30min；使用PBS将离心后的血样沉淀悬浮；在离心管中加入Lymphoprep，然后离心30min；将离心后的血样弃去上层PBS，将白膜层收集到一个新离心管内，每管约装20‑25ml；补加含有2％自体血清的PBS至50ml并上下颠倒混匀，取混匀的溶液离心5min，弃去上清；用含有2％自体血清的PBS重悬细胞至50ml，混匀并计数；弃去上清的溶液加合适体积的淋巴细胞冻存液重悬细胞。本发明使得分离出来的PBMC红细胞含量更少，品质更佳，更有利于下游实验的进行。
- 一种脐血单个核细胞的制备方法-201910291957.9
- 嵐山芮;魏伟;马天宝;林汉标;许超 - 广州市天河诺亚生物工程有限公司
- 2019-04-11 - 2019-09-13 - C12N5/078
- 本发明提供一种脐血单个核细胞的制备方法，包括以下步骤：(1)将采集到的脐血转移到无菌三联袋中；(2)将转移后脐血进行离心分离；(3)将离心完成的血袋放于分浆夹上去除血浆上清，沉淀物即为单个核细胞制剂。本发明的制备方法没有使用羟乙基淀粉和Ficoll淋巴细胞分离液，制备出来的单个核细胞制剂安全无副作用，且单个核细胞的回收率达到了95％以上，细胞活性在93％以上。同时本发明还提供了一种脐血单个核细胞制剂，该制剂体积小，只有10ml，便于新生儿的输注与使用。
- 从外周血提取免疫细胞的方法-201511029699.5
- 宫喜魁;李若鲲;马艳;马艳玲;郝丽敏 - 北京弘润天源基因生物技术有限公司
- 2015-12-31 - 2019-09-13 - C12N5/078
- 本发明公开了一种从外周血提取免疫细胞的方法，属于生物技术领域。本发明包括如下步骤：外周血的预处理：将加入抗凝剂的外周血移入离心管中，750g，10min离心，吸取上层血浆备用，下层细胞加入等体积的PBS溶液，混匀获得细胞悬液；将含有海藻糖，超低粘度海藻酸钠和泛影酸钠的分离液加入到离心管中；将所述细胞悬液平铺到所述离心液上，在8‑25℃，500g‑800g，10～30min条件下离心，吸取白膜层细胞获得免疫细胞；将所述免疫细胞等体积加入到冻存液中混匀，分装于细胞冻存管中，将所述细胞冻存管放置于程序冻存盒中，先于‑80℃冷冻，然后转入液氮中冻存。本发明配方中的全部原料均符合静注级原料药标准。
- 一种分离中胚层基质细胞的方法-201910311628.6
- 赵静;刘洋;陆梦晓;郑媛媛;李绍平;徐文斐;张帅 - 青岩生物科技（湖州）有限公司
- 2019-04-18 - 2019-08-27 - C12N5/078
- 本发明公开了一种用于分离中胚层基质细胞的方法，具体包括如下步骤：采集外周血，梯度离心，吸取单个核细胞层，贴壁培养，CXCR4磁珠分选等。本发明的方法能够有效提高中胚层基质细胞的分离率，具有操作简单、快速、高效，获取细胞多等优点，为临床上中胚层基质细胞的应用提供了一种有效的分离方法。
- 一种小鼠红细胞悬液的制备方法-201910492387.X
- 杨夏 - 广州鸿泉生物科技有限公司
- 2019-06-06 - 2019-08-23 - C12N5/078
- 本发明公开了一种小鼠红细胞悬液的制备方法，包括以下步骤：a.采集多只成年小鼠血液各0.2～0.4ml，将小鼠血液与红细胞保存液按照体积比为1:1.5～2.5混合均匀后保存，保存温度为2～8℃；b.向步骤a得到的混合液中加入生理盐水至总体积为15ml且摇匀，在转速为1400～1600rpm下离心4～6min，弃去上清液；c.重复步骤b两次到四次后，再加入生理盐水至总体积为15ml且摇匀，在转速为1400～1600rpm下离心10min，弃去上清液；d.向步骤c中弃去上清液所得的溶液中加入无菌生理盐水制备体积分数为2％的小鼠红细胞悬液然后保存，保存温度为2～8℃；延长小鼠红细胞的有效保存时间。
- 一种外周血免疫细胞的静置分离方法-201910459848.3
- 丁海雷;成玉萍;莫伟;吕晓龙 - 江苏省北科生物科技有限公司
- 2019-05-29 - 2019-08-20 - C12N5/078
- 本发明提出了一种人外周血免疫细胞的分离方法，本方法采用无菌容器静置的方式使外周血中免疫细胞实现分离，无菌容器静置法采用无菌容器静置的方式减少了离心作用对细胞的损伤，保证细胞的活率；同时静置分离法中添加羟乙基淀粉还能显著提高免疫细胞的回收率。
- 一种电转后PBMC的培养方法-201810129577.0
- 金华君;徐飞;刘韬;李林芳;钱其军 - 上海细胞治疗集团有限公司;上海细胞治疗研究院
- 2018-02-08 - 2019-08-16 - C12N5/078
- 本发明提供一种电转后PBMC的培养方法，该方法包括电转人外周血单个核细胞后，先使用含人外周血单个核细胞培养液的上清液的复苏液培养该电转后的人外周血单个核细胞2‑10小时的步骤。本发明还包括使用所述复苏液复苏冻存的人外周血单个核细胞以及培养人外周血单个核细胞的方法。本发明也包括所述复苏液。本发明的复苏液能促进电转后外周血单个核细胞的生长，进而提高其活力；采用本发明的复苏液对冷冻人外周血单个核细胞进行复苏和电转后孵育，能够有效减少冷冻复苏细胞在电转后的死亡，促进细胞增殖。
- 红细胞的产生与用途-201910023181.2
- 布赖恩·柯蒂斯·特纳;Y·里菲利;G·A·伯德 - 泰加生物工艺学公司
- 2014-03-11 - 2019-07-30 - C12N5/078
- 本发明涉及红细胞的产生与用途。本发明涉及通过将造血干细胞在诱导细胞存活和增殖的蛋白质存在下进行分化而从造血干细胞产生红细胞。本发明涉及一种延长成熟红细胞群体在体外的半寿期的方法，所述方法包括：将红细胞群体保持在培养基中，所述培养基含有外源多肽，所述外源多肽包含一种或多种Bcl‑2同源结构域。
- 提高免疫反应性的方法-201410151457.2
- G·巴耶尔;H·洛博内;M·舒斯特;G·拉梅施万特内;D·沃尔夫 - 因斯布鲁克医科大学;阿派隆生物制剂股份公司
- 2008-12-10 - 2019-07-26 - C12N5/078
- 本发明涉及用于提高接触过抗原的免疫系统细胞的免疫反应性的体外或离体方法，包括降低或者抑制这些细胞的Cbl‑b功能，从而提高所述细胞针对该抗原的免疫反应性。
- 原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的分离、培养及体外扩增方法-201910330195.9
- 蒋小峰;黄镇辉;张大伟;卢海武;温子龙;郑强;刘颂航;杨学伟;曹良启;彭和平;薛平 - 广州医科大学附属第二医院
- 2019-04-23 - 2019-07-23 - C12N5/078
- 本发明公开了原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的分离、培养及体外扩增方法，发明人取无菌新鲜肿瘤癌巢和癌旁组织，通过混合酶溶液进行消化分离，并接种于共刺激培养基中，从而实现淋巴细胞的培养和体外扩增。本发明在提取上解决了TIL提取数量和纯度低的关键问题，在培养上可使TIL往具有免疫活性的CD8+TIL亚型分化扩增，在扩增上，创造性地使用肝癌患者的外周血血浆和PBMC作饲养进行体外培养，并有效扩增TIL细胞，解决自体TIL过继免疫治疗引起的免疫排斥问题。在分选上，使用StemCell磁珠法分选出具有特异识别能力的CD8+TIL细胞，为下一步免疫治疗的临床研究奠基良好基础，具有显著的应用前景。
- 一种适用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基-201610693937.0
- 颜学恒;周艳 - 上海逍鹏生物科技有限公司
- 2016-08-19 - 2019-07-16 - C12N5/078
- 本发明涉及一种适用于高密度细胞培养体系的外周血细胞培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，基础培养基为RMPI 1640培养基，添加组分及其浓度如下：牛血清，160‑220ml/L；PHA‑植物血球凝集素，16‑30g/L；L‑谷氨酰胺，8‑12g/L；谷胱甘肽，8‑14g/L；亚油酸，0.1‑0.3g/L；硫辛酸，0.1‑0.3g/L；各添加组分的浓度以外周血细胞培养基的总体积为基准。与现有技术相比，本发明的外周血细胞培养基能够使得外周血细胞快速、大量的增殖，增殖效果好，培养时间短，特别适合外周血细胞的高密度细胞培养体系。
- 一种适用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基-201610693939.X
- 颜学恒;周艳 - 上海逍鹏生物科技有限公司
- 2016-08-19 - 2019-07-16 - C12N5/078
- 本发明涉及一种适用于高密度细胞培养体系的免疫细胞的无血清培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RPMI 1640；所述添加组分及其浓度如下：人白蛋白，12‑16g/L；转铁蛋白，20‑25mg/L；人重组胰岛素，24‑30mg/L；L‑谷氨酰胺，8‑10g/L；HEPES，5‑7g/L；以及白介素‑2，3×105‑8×105IU/L。与现有技术相比，本发明的免疫细胞无血清培养基采用RPMI 1640作为基础培养基以及特定的添加组分的组合，能够使得免疫细胞快速、大量的增殖，且细胞存活率更高，特别适合免疫细胞的高密度细胞培养体系。
- 目标细胞的多重捕获配体修饰的多层纳米粒柔性支架及其应用-201610072586.1
- 谢洪平;刘玲;蔡雪萍 - 苏州大学
- 2016-02-02 - 2019-07-05 - C12N5/078
- 本发明涉及一种目标细胞的多重捕获配体修饰的多层纳米粒柔性支架及其应用，其以活性大分子为交联剂，在载体基质上构建多层纳米粒子的粗糙表面，再在该粗糙表面上化学连接活性大分子，获得了多层纳米粒柔性支架，然后在该多层纳米粒柔性支架上固定多重捕获配体，得到连接有多重捕获配体的多层纳米粒柔性支架。本发明基于大分子交联法实现了简单、快速、可控的纳米粒有序多层柔性支架组装，该支架既具有纳米粒结构，又具有柔性结构，同时表现出了高粗糙度的优势，对于目标细胞，该支架表现出了极低的非特异性吸附，修饰了多价适体的支架具有极高特异性捕获效率，可制备成体外流通捕获系统应用于体外循环捕获体内目标细胞方面。
- 一种团头鲂外周血白细胞分离和原代培养方法-201610333068.0
- 刘波;赵振新;戈贤平;谢骏;任鸣春;周群兰;缪凌鸿 - 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心
- 2016-05-18 - 2019-06-28 - C12N5/078
- 本发明涉及一种团头鲂外周血白细胞分离和原代培养方法，属于动物外周血白细胞分离和培养领域。其包括动物强化培养、血液收集、白细胞分离和培养等步骤：按照常规方法在无菌环境中抽取一定量鱼血，然后采用Percoll梯度离心的方法分离血液中外周白细胞，将所得细胞进行洗涤纯化，并放在适宜温度中进行培养；所述步骤中，以改良的RPMI‑1640培养液作为培养基，配置不同浓度的Percoll分离液，细胞在培养温度27℃、95%湿度、5%CO2环境中进行原代培养2h以上即可贴壁生长。采用本发明能够获得团头魴生长良好的外周血白细胞。
- 有效改善骨髓造血微环境的免疫细胞的制备方法-201910256695.2
- 谢海涛;陈玲珍;薛卫巍;王乃会 - 广东先康达生物科技有限公司
- 2019-03-29 - 2019-06-21 - C12N5/078
- 本发明公开了一种有效改善骨髓造血微环境的免疫细胞的制备方法，包括如下步骤：从血液中分离出血细胞；将血细胞置于0‑5摄氏度的箱体内培养1‑2小时；将血细胞置于细胞激活培养基中进行血细胞激活培养10‑20小时，以便得到初步扩增的血细胞；将血细胞置于至少一种细胞培养基中加入激活试剂进行血细胞培养10‑30小时，以便得到激活的血细胞；将激活的血细胞经过至少一次的生理盐水清洗，从而得到有效改善骨髓造血微环境的免疫细胞的制备方法。本发明具有能通过改善骨髓造血微环境达到治疗再生障碍性贫血等造血性疾病的效果的优点。
- 一种细胞外囊泡的提取方法及试剂盒-201910156434.3
- 陆路 - 易春;方国伟;陆路
- 2019-03-01 - 2019-05-31 - C12N5/078
- 本发明涉及生物分离提取技术领域，具体涉及一种细胞外囊泡的提取方法。所述方法包括：提供生物样本；在足以使生物样本中杂质部分或全部保留在捕获表面之上的条件下，使所述生物样本经过至少两次与所述捕获表面接触；其中，所述杂质为生物样本中除细胞外囊泡之外的部分或全部的其他物质，所述捕获表面包括球状颗粒多孔材料的内表面和/或外表面；在杂质部分或全部保留在捕获物表面之上时，流穿液即为提取到包含细胞外囊泡的液体；或进一步对上述流穿液进行浓缩。本发明能够快速对细胞外膜囊泡的进行分离纯化，并且该分离操作简单，单次使用成本低，分离样本纯度高，样本生物活性保持良好，应用在生物标志物发现、生物治疗等方面的基础研究与工业生产中。
- 利用人造血干细胞制备巨核细胞及血小板的方法和体系-201410397915.0
- 蒋永平;关欣;秦蒙;戴卫 - 苏州协和方舟生物医药研发有限公司
- 2014-08-13 - 2019-05-24 - C12N5/078
- 本发明涉及利用人造血干细胞制备巨核细胞及血小板的方法和体系。本发明的技术方案可使得CD34+干细胞在保持原来干性特征的基础上进行有效和大量的扩增，并进一步采用定向分化的技术制备成熟的巨核细胞，用于生产血小板。本发明的技术方案可解决血小板用于疾病的移植治疗和科研的来源问题，可为国防提供血液成分细胞的战略储备。
- 一种脐带血再生粒子及其制备方法与应用-201811147869.3
- 孔五一 - 孔五一
- 2018-09-29 - 2019-05-21 - C12N5/078
- 本发明公开了一种脐带血再生粒子及其制备方法与应用，制备方法步骤是：S1、取脐带血进行离心分层；S2、取一级下层沉淀加入无菌缓冲液再进行离心分层；S3、取二级下层沉淀，加入无菌红细胞裂解液进行离心分层；S4、取三级下层沉淀，加入无菌缓冲液进行离心分层；S5、分别取一级上层溶液、二级上层溶液、四级上层溶液，进行离心分层，离心分层后，收集所有沉淀，加入pH值7.0‑7.4、含有血清的培养基，置于37℃、5％CO2的培养箱中进行培养，每2‑3天更换培养基一次；S6、经培养处理，检测合格后，收集所有培养成分，离心收集脐带血再生粒子。本发明的脐带血再生粒子可以在组织细胞再生与修复中进行应用。
- 专利分类
