[发明专利]硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞在膈肌功能障碍中的应用在审
| 申请号： | 201810711171.3 | 申请日： | 2018-07-03 |
| 公开（公告）号： | CN108743608A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 吴东栋;任志广;李涛;卫文强;沈永红;陆丹;刘诗语;高荧苒;洪亚;潘韦彤;郭建成;姬新颖 | 申请（专利权）人： | 吴东栋;任志广;李涛;卫文强;沈永红;陆丹;刘诗语;高荧苒;洪亚;潘韦彤;郭建成;姬新颖 |
| 主分类号： | A61K33/04 | 分类号： | A61K33/04;A61P21/00;A61P11/00;A61K49/00;A61K31/739 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100176 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 膈肌功能 脓毒症 硫化氢 脂多糖诱导 大鼠 诱导 无血清培养基 硫化氢供体 细菌内毒素 成肌细胞 培养大鼠 实验检测 障碍模型 障碍研究 对数期 抗氧化 脂多糖 凋亡 供体 构建 抗炎 膈肌 增殖 应用 生长 预防 | ||
1.硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞在膈肌功能障碍中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其包括以下步骤：
培养大鼠成肌细胞L6细胞，待L6细胞生长至对数期更换无血清培养基，然后加入细菌内毒素脂多糖，并快速加入硫化氢供体继续培养；通过实验检测获取的指标用于阐明脓毒症诱导的膈肌功能障碍的机制。
3.根据权利要求2所述的应用，其中，实验检测包括蛋白免疫印迹法、酶联免疫吸附法、EDU法、MTS法、荧光法、分光光度法、TUNEL法和ELISA法中的一种或多种的组合。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其中，所述细菌内毒素脂多糖的用量为250μg/mL；
优选地，所述硫化氢供体为NaHS；
优选地，所述硫化氢供体的用量为100μmol/L。
5.根据权利要求3所述的应用，其中，通过蛋白免疫印迹法检测获取硫化氢合成酶CSE、CBS和3-MST蛋白表达量的指标，用于阐明硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞对L6细胞硫化氢合成酶表达量的影响；
优选地，通过MTS法检测获取L6细胞活力的指标，用于阐明硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞对L6细胞活力的影响。
6.根据权利要求3所述的应用，其中，通过EDU法检测获取L6细胞增殖率的指标，用于阐明硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞对L6细胞增殖能力的影响；
优选地，通过TUNEL法和蛋白免疫印迹法检测获取L6细胞凋亡率和凋亡信号通路蛋白的表达量的指标，用于阐明硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞对L6细胞凋亡的影响。
7.根据权利要求3所述的应用，其中，通过荧光法、分光光度法和蛋白免疫印迹法检测获取L6细胞活性氧含量、CAT活性、SOD活性、GSH-Px活性和MAPK信号通路蛋白ERK、p38和JNK的表达量的指标，用于阐明硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞对L6细胞抗氧化能力的影响。
8.根据权利要求3所述的应用，其中，通过ELISA法和蛋白免疫印迹法检测获取L6细胞的MCP-1、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-18表达水平的指标，以及p50、p-p65表达水平的指标和p-p65/p65比率的指标，用于阐明硫化氢作用脂多糖诱导L6细胞对L6细胞分泌炎性因子的水平和TLR4/NF-κB信号通路蛋白的影响。
9.一种非治疗目的的脓毒症大鼠膈肌功能障碍模型的构建方法，其包括以下步骤：
向大鼠腹腔中注入细菌内毒素脂多糖，随后立即向腹腔中注入硫化氢供体；培养大鼠构建获得脓毒症大鼠膈肌功能障碍模型；
优选地，所述细菌内毒素脂多糖的注入量为5mg/kg；
优选地，所述硫化氢供体为NaHS；
优选地，所述硫化氢供体的注入量为5mg/kg。
10.权利要求9所述的构建方法获得的脓毒症大鼠膈肌功能障碍模型。
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