[发明专利]蛋白-细胞偶联物、其制备方法和用途

说明书

本发明属于免疫学、生物医学领域，具体涉及一种蛋白‑细胞偶联物，其特征在于，所述蛋白与细胞通过双功能交联剂偶联。本发明还涉及所述蛋白‑细胞偶联物的制备方法和用途。本发明的蛋白‑细胞偶联物可用于预防或治疗多种疾病，例如恶性肿瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病等。

本分案申请是中国专利申请号为201310234603.3、申请日为2013年6月14日、发明名称为“蛋白-细胞偶联物、其制备方法和用途”的中国专利申请案的分案申请。

技术领域

本发明属于免疫学、生物医学领域，涉及一种偶联物，特别是蛋白与细胞的偶联物，本发明还涉及所述蛋白-细胞偶联物的制备方法和用途。

背景技术

肿瘤的发生发展与免疫监视功能的减退有关，而某些感染可通过给予病原微生物疫苗而使感染得到有效的预防，对于自身免疫耐受被打破的自身免疫病则可通过免疫调节或免疫耐受的诱导而重新恢复免疫耐受。所有这些免疫干预措施都与抗原或抗体有关，而绝大多数抗原或抗体是蛋白质，因此，诱导对抗原蛋白的免疫反应或免疫耐受或者充分利用抗体的靶向性是上述免疫干预措施的目的。

如何将抗原蛋白高效地输送到淋巴组织是实现上述免疫干预的关键。如果能将抗原蛋白有效牢固地偶联到具有免疫功能的细胞表面，由于免疫细胞有向淋巴组织迁移定位的特性或者提呈抗原的特性，通过输注免疫细胞即可把蛋白抗原有效地输送到淋巴组织或更好的提呈。或者可以利用抗体的靶向性将免疫效应细胞锚定靶细胞，以提高免疫效应细胞的杀伤效率。

已有的偶联蛋白到细胞膜上的方法是用碳化二亚胺乙烯

(Ethylene Carbodiimide,ECDI)将一种已知抗原通过使细胞固定将抗原偶联到细胞表面(luo,et al.Proc Natl Acad Sci U S A.2008Sep23；105(38):14527-32.；SmarrCB,et al.Antigen-fixed leukocytes tolerize Th2responses in mous e models ofallergy.J Immunol.2011Nov 15；187(10):5090-8.)。此方法制备的的细胞因被ECDI固定而死亡，根据上述文献报道，输注这种细胞只能引起抗原特异性免疫耐受而不能诱导对抗原的免疫应答。

因此，本领域亟需一种将蛋白偶联到活细胞上的方法，以期更有效地诱导免疫应答，用于感染、肿瘤等的预防或治疗。

发明内容

本发明的发明人经过长期、大量的实验研究，令人惊奇地发现利用双功能交联剂可以将蛋白与细胞偶联在一起，并且保持蛋白和细胞的活性，由此完成了本发明。

本发明第一方面涉及蛋白-细胞偶联物，其为蛋白和细胞分别与连接接头共价连接形成的偶联物；优选地，所述细胞在未偶联时，其表面分布着游离的巯基；优选地，所述的连接接头来源于双功能交联剂，所述双功能交联剂同时含有能与氨基发生反应的基团和与巯基发生反应的基团。

根据本发明第一方面任一项的蛋白-细胞偶联物，其中所述细胞为具有免疫功能的细胞；优选地，所述细胞选自淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞中的至少一种。

在本发明的实施方案中，所述细胞为淋巴细胞，所述淋巴细胞例如为T淋巴细胞或B淋巴细胞。

根据本发明第一方面任一项的蛋白-细胞偶联物，其中所述的连接接头来源于双功能交联剂。

在本发明的具体实施方案中，其中所述的双功能交联剂同时含有琥珀酰亚氨基和马来酰亚氨基基团。