[发明专利]一种BANCR基因敲减稳转细胞、其构建方法和应用

说明书

本发明涉及一种BANCR基因敲减稳转细胞、其构建方法和应用。本发明所述方法包括：制备携带有BANCR基因干扰序列的重组慢病毒，其中，所述干扰序列如SEQ ID NO：3所示；以及，将所述重组慢病毒转染细胞，进行筛选和鉴定，得到BANCR基因敲减稳转细胞。本发明采用特定干扰序列，通过重组慢病毒的方式能够将人BANCR基因的表达敲减至20～30％左右，可解决高效敲减BANCR基因的技术问题；本发明获得BANCR基因稳定敲减的细胞能够用于制备动物模型、研发药物以及基因治疗，为BANCR基因的功能研究提供平台，也为后续的基因治疗方法提供理论依据和支持。

技术领域

本发明涉及基因敲减领域，具体而言，涉及一种BANCR基因敲减稳转细胞、其构建方法和应用。

背景技术

长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子，它们虽然不编码蛋白质，但以RNA的形式在表观遗传调控、转录调控和转录后调控等多个层面上调控基因的表达。lncRNA起初被认为是基因组转录的“噪音”，不具备生物学功能，然而，近年来的相关研究表明，lncRNA同时参与了染色质修饰、X染色体沉默、转录干扰、转录激活、核运输等多个重要的调控过程，尤其是在肿瘤发生发展过程中也起到了重要作用。直到目前，发现的具有功能的lncRNA已超过7000个，其中有些可以作为肿瘤诊断及监测进展的指标，并能够为肿瘤的治疗提供靶点，未来也许也可以作为肿瘤的疗效判定标准之一。

BANCR(BRAF activated long non-coding RNA)是新发现的一个lncRNA，位于第9号染色体，全长688bp，它是由BRAF基因发生突变(BRAFV600E)产生的。目前发现，BANCR参与Wnt信号通路、MAPK信号通路、EMT过程、NF-kappaB1过程和炎症反应，BANCR的过表达与黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、甲状腺癌、胃癌、结肠癌、非小细胞肺癌等的发生和转移有关。BANCR在未来可能在肿瘤的诊断和治疗中发挥诊断性标记物以及抗肿瘤药物靶点的重要作用，对提高肿瘤及相关疾病的临床诊断及治愈率，具有重要作用。但目前关于BANCR的具体作用机制及其与各信号通路的具体关系尚为研究清楚。

慢病毒干扰载体能够对目标基因进行有效敲减，为研究基因功能提供良好的平台。目前，国内外尚未见BANCR基因的慢病毒干扰载体。因此，提供能够高效敲减BANCR基因的慢病毒干扰载体对研究BANCR基因的功能十分重要，同时，也对后续依赖于BANCR的基因治疗方法提供理论基础。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种BANCR基因敲减稳转细胞的构建方法；

本发明的第二目的在于提供根据前述构建方法获得的BANCR基因敲减稳转细胞；

本发明的第三目的在于提供前述BANCR基因敲减稳转细胞在建立BANCR基因敲减动物模型中的应用；

本发明的第四目的在于提供前述BANCR基因敲减稳转细胞在研究BANCR作用机制中的应用。

本发明所述方法采用特定干扰序列，通过重组慢病毒的方式可以高效地对BANCR基因进行敲减，获得该基因被敲减的稳转细胞系，能够解决高效敲减BANCR基因的技术问题。

本发明所述稳转细胞中BANCR基因被有效敲减，所述稳转细胞为BANCR基因的研究提供平台，同时为基于BANCR的发病机理以及基因治疗方法提供研究基础。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种BANCR基因敲减稳转细胞系的构建方法，所述方法包括：

(1)制备携带有BANCR基因干扰序列的重组慢病毒，其中，所述干扰序列如SEQ IDNO：3所示；