[发明专利]一种BANCR基因敲减稳转细胞、其构建方法和应用

权利要求书

1.一种BANCR基因敲减稳转细胞的构建方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)制备携带有BANCR基因干扰序列的重组慢病毒，其中，所述干扰序列如SEQ ID NO：3所示；

(2)将所述重组慢病毒转染细胞，进行筛选和鉴定，得到BANCR基因敲减稳转细胞。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)包括将携带有BANCR基因干扰序列的重组慢病毒载体与慢病毒载体系统中的包装质粒混合，转染包装细胞，即得携带有BANCR基因干扰序列的重组慢病毒。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述细胞为人源细胞；更优选地，所述人源细胞为人皮肤黑色素瘤细胞；最优选地，所述人皮肤黑色素瘤细胞为A375。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述重组慢病毒载体为LV3，所述包装质粒为pGag/Pol、pRev和pVSV-G，所述包装细胞为293T细胞。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述筛选采用抗生素或者流式细胞仪。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述鉴定采用荧光显微镜观察和/或荧光定量PCR反应，所述荧光定量PCR反应包括提取待鉴定细胞的总RNA，反转录为cDNA，以所述cDNA为模板进行荧光定量PCR。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述荧光定量PCR反应的引物如SEQID NO：13-14所示；优选地，所述荧光定量PCR反应的退火温度为61～63℃，循环数为38～42个；更优选地，所述荧光定量PCR反应的退火温度为62℃，循环数为40个。

8.根据权利要求1～7任一项所述构建方法获得的BANCR基因敲减稳转细胞。

9.权利要求8所述BANCR基因敲减稳转细胞在建立BANCR基因敲减动物模型中的应用；优选地，所述动物模型为黑色素瘤动物模型、视网膜母细胞瘤动物模型、甲状腺癌动物模型、胃癌动物模型、结肠癌动物模型或非小细胞肺癌动物模型中的应用；更优选地，所述动物模型为黑色素瘤动物模型。

10.权利要求8所述BANCR基因敲减稳转细胞在研究BANCR作用机制中的应用；优选地，所述BANCR作用机制为BANCR在黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、甲状腺癌、胃癌、结肠癌和非小细胞肺癌发病机制中的作用；更优选地，所述BANCR作用机制为BANCR在黑色素瘤发病机制中的作用。