[发明专利]一种FerritinH、Bcl2及EGFP基因联合修饰的神经干细胞制备方法及应用在审
| 申请号： | 201810608064.8 | 申请日： | 2018-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN108795987A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 沈君;张芳;毛家骥 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;A61K35/30;A61K49/00;A61K49/06;A61P9/10 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 单香杰 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 修饰 神经干细胞 干细胞 制备 脑梗死 神经系统病变 移植 干细胞治疗 转基因治疗 基因联合 科学意义 临床应用 生存能力 替代治疗 系统监测 荧光成像 作用机制 磁共振 抗凋亡 慢病毒 双模态 有效地 构建 活体 示踪 无创 成像 应用 存活 联合 治疗 转化 安全 | ||
1.一种基因工程化的可示踪神经干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 合成融合基因FerritinH-T2A-Bcl2，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；
S2. 将融合基因FerritinH-T2A-Bcl2插入含有EGFP基因的慢病毒表达载体，得到重组质粒；
S3. 将重组质粒转染宿主细胞，制备FerritinH-T2A-Bcl2-EGFP过表达慢病毒；
S4. 将FerritinH-T2A-Bcl2-EGFP过表达慢病毒转染神经干细胞，得到基因工程化的可示踪神经干细胞FerritinH-Bcl2-EGFP-NSCs。
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，慢病毒表达载体为GV218载体。
3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，宿主细胞为293T细胞。
4. 根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S2中，线性化载体DNA与融合基因FerritinH-T2A-Bcl2 DNA的摩尔比为1：（3～9）。
5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S4中，MOI指数为10。
6. 根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤S4中，转染时间为24 h。
7.根据权利要求1～6任一所述制备方法制备得到的基因工程化的可示踪神经干细胞FerritinH-Bcl2-EGFP-NSCs。
8.根据权利要求7所述基因修饰的可示踪神经干细胞，其特征在于，该神经干细胞同时过表达FerritinH、Bcl2及EGFP基因。
9.权利要求2中所述的融合基因FerritinH-T2A-Bcl2、重组质粒、FerritinH-T2A-Bcl2-EGFP过表达慢病毒和/或基因工程化的可示踪神经干细胞FerritinH-Bcl2-EGFP-NSCs在制备治疗脑梗死的制剂中的应用。
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