[发明专利]一种检测TGFBI基因多态性的试剂盒

权利要求书

1.一种检测TGFBI基因多态性的试剂盒，其特征在于，包括检测TGFBI基因上的R124H位点的基因扩增引物和测序引物、阳性质控品、空白对照品、PCR反应试剂和焦磷酸测序试剂；

所述检测TGFBI基因上的R124H号位点的基因扩增引物和测序引物的序列为：

正向引物：5'-ACCTTTACGAGACCCTGGGA-3'

反向引物：5'-TTGCTAGGGGCGAAGATG-3'

测序引物：5'-TCAGCTGTACACGGAC-3'

其中，所述反向引物的5’端进行生物素标记。

2.如权利要求1所述的检测TGFBI基因多态性的试剂盒，其特征在于，阳性质控品包括阳性质控品1、阳性质控品2和阳性质控品3；

所述阳性质控品1为靶序列的野生纯合子质粒，所述靶序列为如SEQ ID No.4所示，

所述阳性质控品2为靶序列的突变纯合子质粒，所述靶序列如SEQ ID No.5所示，

所述阳性质控品3为野生纯合子质粒与突变纯合子质粒组成的质粒混合物；其中，质粒载体为pUC57；所述阳性质控品3中野生纯合子质粒和突变纯合子质粒的数量比为1:1。

3.如权利要求1所述的检测TGFBI基因多态性的试剂盒，其用于检测TGFBI基因多态性的方法为：

1)DNA提取：口腔上皮细胞全基因组DNA的提取；

2)实时荧光定量PCR反应：取上述基因组DNA 30-50ng进行PCR扩增反应，反应条件为95℃预变性处理5min；然后依次在95℃30s，54℃40s,72℃15s进行45个循环，然后72℃5min，最后4℃；

3)焦磷酸测序：将所获的PCR扩增产物在QIAgen PyroMark Q24上进行焦磷酸测序；

4)检测结果分析：

X、Y均为A、T、C或G的一种，当X≥90％，Y≤10％时，待测样本为TGFBI基因上R124H位点野生型；

当X≤10％，Y≥90％时，待测样本为TGFBI基因上R124H位点纯合突变型；

当40％≤X≤60％，40％≤X≤60％时，待测样本为TGFBI基因上R124H位点杂合突变型。