[发明专利]具有抗肿瘤活性的吲哚生物碱及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一类吲哚生物碱，本发明从投喂吲哚‑3‑甲醇的大刀螳螂肠道真菌IFB‑TL01(Daldinia eschscholzii)的发酵液中提取的一类吲哚生物碱。本发明所述吲哚生物碱Dalesindole B(化合物1)为新化合物，Dalesindole C(化合物2)为新骨架化合物。药理实验结果表明对多种肿瘤细胞的增殖有抑制活性，特别是可以选择性抑制HL‑60白血病肿瘤细胞，可以作为抗肿瘤药物。

技术领域

本发明属于微生物工程技术和药理学领域，具体涉及从投喂吲哚-3-甲醇的大刀螳螂肠道真菌炭球菌属(Daldinia)光轮层炭壳IFB-TL01(Daldinia eschscholzii)的发酵液中提取的一类吲哚生物碱及其制备方法和应用。

背景技术

新化合物的发现和运用，对于新药研发具有非常重要的作用。其中吲哚生物碱是一类含有吲哚或二氢吲哚结构的有机分子。由于吲哚类化合物具有非常广泛的药理活性，如抗血小板聚集，抗炎，抗菌，抗肿瘤，杀虫以及免疫抑制等，从而引起人们的广泛关注。特别是吲哚环中C-2，C-3位取代是制备系列结构和生物活性多样的生物碱的有效方法。

当今社会，癌症已经严重威胁人类健康，成了当之无愧的“第一杀手”。白血病是造血系统的恶性肿瘤，俗称“血癌”，在我国的发病率约为3/10万～4/10万人口，多发生于青少年，是35岁以下发病率、病死率最高的恶性肿瘤，其中急性白血病发病急、发展快、病死率最高。目前，我国各地区的白血病发病率在成人各类肿瘤中占第六位，位居儿童肿瘤的首位，且近年来呈增长的趋势，每年至少以3万-4万的速度增加，这不得不引起我们的重视。据调查，我国10岁以下小儿白血病的发病率为7/10万，任何年龄均可能发病，男性发病率高于女性。然而，面对白血病，目前的化疗药物仍然存在治疗有效率偏低，耐药性等问题，严重制约白血病患者的治疗效果和生命质量。因此，从天然产物中寻找有效的白血病治疗药物已经成为国内外重要的研究课题。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种从投喂吲哚-3-甲醇的大刀螳螂肠道真菌炭球菌属(Daldinia)光轮层炭壳IFB-TL01(Daldiniaeschscholzii)的发酵液中分离得到的吲哚生物碱；本发明另一个目的是提供吲哚生物碱的制备方法和应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

具有抗肿瘤活性的吲哚生物碱，其结构式为：

本发明所述的具有抗肿瘤活性的吲哚生物碱的制备方法，其包括以下步骤：

(1)将炭球菌属Daldinia光轮层炭壳Daldinia eschscholzii IFB-TL01的菌块接种于麦芽培养基中，于摇床上，培养2～3天，作为种子液；

(2)将步骤(1)所得的种子液接种到新的麦芽培养基中，继续培养2～3天，并且分别于24，48，72小时投喂吲哚-3-甲醇，至溶液中的终浓度为1.0mM，同等条件下继续培养8～10天；

(3)对步骤(2)所得培养液经纱布过滤，滤液用乙酸乙酯萃取，离心、浓缩得到黑色浸膏A；

(4)对步骤(3)所得浸膏A进行硅胶柱层析分段，用石油醚：丙酮进行梯度洗脱，得到7个洗脱部分A1-A7；

(5)取步骤(4)的A3段采用硅胶柱层析，采用石油醚：丙酮梯度洗脱，获得F1–F7 7个洗脱部位，取F3馏分经Sephadex LH-20柱层析，甲醇洗脱，甲醇洗脱液上高压制备液相，纯化获得化合物Dalesindole B(化合物1)；

(6)取步骤(4)的A4段经C-18柱层析梯度洗脱，获得馏分A4a–A4e，馏分A4c经ODS柱梯度洗脱，获得馏分A4c1–A4c6，A4c5经凝胶柱层析，半制备液相洗脱纯化，获得化合物Dalesindole C(化合物2)。