[发明专利]一种鹅掌楸林分后代树种类型的鉴定方法

说明书

本发明公开了一种鹅掌楸林分后代树种类型的鉴定方法及其专用试剂盒，该方法包括：1)提取后代树种的叶片DNA；2)进行SSR‑PCR检测；3)后代树种判定，电泳能特异性扩增出112bp的产物为中国鹅掌楸，能特异性扩增出124bp的产物为北美鹅掌楸，能特异性扩增出112bp和124bp 2种产物为杂交鹅掌楸。本发明的鹅掌楸林分后代树种类型的鉴定方法，具有重复性与稳定性好等优点，既可对鹅掌楸天然林以及人工林后代树种类型，进行有效鉴定，尤其是处于幼苗阶段的鹅掌楸天然林人工林的后代，又可对种子园的种子是中国种、北美种、还是杂交种进行鉴定，速度快，效率高，结果准确，具有很好的实用性。

技术领域

本发明属于树种鉴定技术领域，具体涉及一种鹅掌楸林分后代树种类型的鉴定方法。

背景技术

鹅掌楸属(Liriodendron L.)是木兰科(Magnoliaceae)植物，属古老属种之一。现包括三个种：中国鹅掌楸(Liriodendron chinense(Hemsl.)Sarg.)，北美鹅掌楸(Liriodendron tulipifera Linn.)以及两者杂交种杂交鹅掌楸Liriodendron chinense×tulipifera。鹅掌楸属植物是研究植物进化历史进程的理想材料，具有重要的研究意义。

中国鹅掌楸树干通直，可用作木材，马褂形三裂叶片，具有较高的观赏价值属于国家二级珍稀濒危保护植物。北美鹅掌楸材质优良，淡黄褐色，纹理密致美观，切削性光滑，易施工，为船舱，火车内部装修及室内高级家具用材，为美国重要用材树种之一。杂交鹅掌楸具杂交优势，抗逆性与生长特性均明显优于中国种和美国种。但由于鹅掌楸属植物自然授粉不良，发芽率低，现在得到杂交种的方式主要为人工授粉或嫁接繁殖。现有的方法都相对来说比较繁杂，人们一直在寻找更加方便有效的方法。

传统的杂交鹅掌楸鉴定主要依据其与两亲本种在形态特征(刘玉新等， 2014)、木材解剖(王丰等，2014)和同工酶酶谱(丁小飞等，2009)等方面的差异。但形态特征在苗期差异并不明显且易受环境条件影响，解剖方法在苗期也不易实现，同工酶标记受基因表达限制也会影响使用，因此，现有的品种鉴定方法，并不能完全满足使用需求。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种鹅掌楸林分后代树种类型的鉴定方法，满足对鹅掌楸天然林和人工林后代树种类型的鉴定使用需求，尤其是幼苗阶段的鹅掌楸天然林以及人工林的后代。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种鹅掌楸林分后代树种类型的鉴定方法，包括以下步骤：

1)提取后代树种的叶片DNA；

2)进行PCR检测；

3)后代树种判定，电泳能特异性扩增出112bp的产物为中国鹅掌楸，能特异性扩增出124bp的产物为北美鹅掌楸，能特异性扩增出112bp和124bp 2种产物为杂交鹅掌楸。

步骤1)中，叶片为刚展开的嫩叶，液氮处理后放置-80℃备用。

步骤1)中，DNA提取采用CTAB法进行。

步骤2)中，PCR扩增的10μL体系为：75ng基因组DNA，1.0μL 10×PCR Buffer,1.2μL2.5mM/L MgCl，0.2μL 10mM/L dNTP,0.5μL 10μM/L左端引物119F， 0.5μL 10μM/L右端引物119R和0.5个单位Taq酶，ddH₂O补足10μL。

步骤2)中，PCR扩增所使用的引物序列如下：

119F:TACCATCCGTTAGTGCTTCCGCTCCTG；

119R:CTTAGAATCGGGCATTCCACGCATCCA。