[发明专利]一种鹅掌楸林分后代树种类型的鉴定方法有效
| 申请号： | 201810543424.0 | 申请日： | 2018-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN108660250B | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 陈金慧;龙晓飞;肖保荣;章文鑫;王宇浩;王鹏凯;施季森;胡凌峰;杨立明 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 32274 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210037 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 后代 树种类型 特异性扩增 人工林 杂交种 树种 杂交鹅掌楸 专用试剂盒 电泳 幼苗阶段 叶片DNA 种子园 判定 | ||
1.一种鹅掌楸林分后代树种类型的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）采用CTAB法提取后代树种的叶片DNA；其中，叶片为刚展开的嫩叶，液氮处理后放置-80℃备用；
2）进行PCR检测；PCR扩增所使用的引物序列如下：
119F： TACCATCCGTTAGTGCTTCCGCTCCTG；
119R： CTTAGAATCGGGCATTCCACGCATCCA；
PCR扩增的10μL体系为：75 ng 基因组DNA，1.0μL 10× PCR Buffer，1.2μL 2.5 mMMgCl2，0.2μL 10mM dNTP，0.5μL 10μM左端引物119F，0.5μL 10μM右端引物119R和0.5个单位Taq酶，ddH2O补足10μL；
采用Touch-down PCR扩增程序：94℃预变性5min，94℃变性15s，61℃复性15s，72℃延伸30s，9个循环；94℃变性15s，52℃复性15s，72℃延伸30s，15个循环，72℃延伸10min，4℃保存；
3）后代树种判定，电泳能特异性扩增出112bp的产物为中国鹅掌楸，能特异性扩增出124bp的产物为北美鹅掌楸，能特异性扩增出112bp和124bp 2种产物为杂交鹅掌楸。
2.权利要求1所述的鹅掌楸林分后代树种类型的鉴定方法的专用试剂盒，其特征在于，至少包括用量为1次以上的引物试剂，所述的引物试剂的引物序列为：119F：TACCATCCGTTAGTGCTTCCGCTCCTG；
119R：CTTAGAATCGGGCATTCCACGCATCCA。
3.根据权利要求2所述的专用试剂盒，其特征在于，还包括DNA标样试剂，所述的DNA标样至少包含112bp和124bp两个条带。
4.根据权利要求3所述的专用试剂盒，其特征在于，还包括DNA提取试剂、电泳试剂。
5.权利要求2-4任一项所述的专用试剂盒在鹅掌楸林分后代树种类型的鉴定中的应用。
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