[发明专利]一种金黄色葡萄球菌抗菌剂及其制备方法和应用

权利要求书

1. 一种金黄色葡萄球菌抗菌剂，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌抗菌剂包括10-60重量份的干酪乳杆菌L. casei ATCC 334 S-层蛋白和100-300重量份的乳酸链球菌素，所述乳酸链球菌素为标准品，其效价为1*10⁶ IU/g，

所述的金黄色葡萄球菌抗菌剂的制备方法，包括以下步骤：

1）干酪乳杆菌L. casei ATCC 334 S-层蛋白的制备；

2）乳酸链球菌素标准品的配制；

3）将步骤1）制备的干酪乳杆菌L. casei ATCC 334 S-层蛋白与步骤2）的乳酸链球菌素标准品混合均匀，即为金黄色葡萄球菌抗菌剂；

所述步骤1）的干酪乳杆菌L. casei ATCC 334 S-层蛋白的制备方法包括如下步骤：

s1）取-20℃甘油管保存的干酪乳杆菌L. casei ATCC 334按2-4%的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃恒温培养18~24 h后，再按2-4%的接种量活化于MRS液体培养基中，37℃恒温培养18~24 h得到培养液，备用；

s2）取步骤s1）的干酪乳杆菌L. casei ATCC 334的培养液离心，收集菌体，PBS清洗并再次离心收集湿菌体；

s3）将步骤s2）的湿菌体用LiCl溶液重悬混匀，37℃温育10~30 min，离心，弃上清，盐酸胍溶液重悬混匀，于37℃恒温培养箱中处理0.5-3 h，离心，收集上清；

s4）将步骤s3）的上清移入14kDa分子截留量的透析袋中，4℃去离子水中透析48h后，离心取上清，即为干酪乳杆菌L. casei ATCC 334S-层粗蛋白，将蛋白冻干得到S-层粗蛋白冻干粉；

s5）通过SP Sepharose预装柱对S-层粗蛋白冻干粉进行纯化得到纯化的干酪乳杆菌L. casei ATCC 334 S-层蛋白。

2.权利要求1所述的金黄色葡萄球菌抗菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）干酪乳杆菌L. casei ATCC 334 S-层蛋白的制备；

2）乳酸链球菌素标准品的配制；

3）将步骤1）制备的干酪乳杆菌L. casei ATCC 334 S-层蛋白与步骤2）的乳酸链球菌素标准品混合均匀，即为金黄色葡萄球菌抗菌剂。

3.根据权利要求2所述的金黄色葡萄球菌抗菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1）的干酪乳杆菌L. casei ATCC 334 S-层蛋白的制备方法包括如下步骤：

1）取-20℃甘油管保存的干酪乳杆菌L. casei ATCC 334按2-4%的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃恒温培养18~24 h后，再按2-4%的接种量活化于MRS液体培养基中，37℃恒温培养18~24 h得到培养液，备用；

2）取步骤1）的干酪乳杆菌L. casei ATCC 334的培养液离心，收集菌体，PBS清洗并再次离心收集湿菌体；

3）将步骤2）的湿菌体用LiCl溶液重悬混匀，37℃温育10~30 min，离心，弃上清，盐酸胍溶液重悬混匀，于37℃恒温培养箱中处理0.5-3 h，离心，收集上清；

4）将步骤3）的上清移入14kDa分子截留量的透析袋中，4℃去离子水中透析48h后，离心取上清，即为干酪乳杆菌L. casei ATCC 334S-层粗蛋白，将蛋白冻干得到S-层粗蛋白冻干粉；

5）通过SP Sepharose预装柱对S-层粗蛋白冻干粉进行纯化得到纯化的干酪乳杆菌L. casei ATCC 334 S-层蛋白。