[发明专利]一种AML1-ETO融合基因检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种基因探针稳定剂，包含以下组分：柠檬酸钠、NaCl、硫酸葡聚糖、去离子甲酰胺、Tris‑HCl、EDTA、甜菜碱和聚乙烯基吡咯烷酮。本发明还公开了所述基因探针稳定剂的用途及含有所述基因探针稳定剂的AML1‑ETO融合基因检测试剂盒。本发明提供的基因探针稳定剂可有效防止探针在存放过程中降解，延长其保存期，提高试剂盒的耐存储性，且能确保检测结果的可靠性，避免出现假阴性结果。本发明含所述基因探针稳定剂的AML1‑ETO融合基因检测试剂盒稳定性好、灵敏度和特异性高，检测结果准确可靠。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种基因探针稳定剂及含有该探针稳定剂的AML1-ETO融合基因检测试剂盒。

背景技术

AML1-ETO融合基因也是AML的一个诊断指标，同时也是预后良好的一个预后指标。急性粒细胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)，主要表现为粒系原始细胞的恶性增殖，它有两个亚型：粒细胞白血病未分化型(M1)与粒细胞白血病部分分化型(M2)。文献报道l2％-20％的急性粒细胞白血病(AML)存在t(8；21)(q22；q22)染色体易位，尤其在AML-M2，其发生率可高达40％-80％。

位于染色体21q22的AML1基因与8q22的ETO基因融合，产生AML1-ETO和ETO-AML1融合基因，一般认为表达量极低或者由于降解导致表达不稳定，故现阶段的研究多集中AML1-ETO融合基因。AML1基因又称RUNX1基因，含12个外显子，全长超过260kb，其断裂点80-90％位于内含子1，其余则发生在内含子2。AML1-ETO融合蛋白是一种转录抑制因子，可抑制正常AML1蛋白介导的功能，改变造血祖细胞自我更新及成熟过程，同时也产生启动异常造血细胞增殖的信号，引起白血病细胞生长。临床上t(8；21)(q22；q22)白血病好发于青年和儿童(5％～10％)，主要与M2型密切相关，并且年龄越小发生率越高。AML1-ETO融合基因阳性是患者预后好的标志，其完全缓解(CR)率可达90％，5年长期无病生存率(event-freesurvival，EFS)可达50％-70％，经化疗或BMT后大部分病人可在短期内转为阴性，但仍有转阳性的可能，及时治疗可再次转阴性，由阴性转阳性或持续阳性可能预示复发。因此，AML1/ETO融合基因的检测对患者M2诊断分型、预后评估及复发监测具有重要的意义。

目前AML1-ETO融合基因的检测方法主要包括以下3种：细胞遗传学检测、基于PCR方法的检测和FISH检测。细胞遗传学检测需培养细胞，耗时较长，只能检测中期的细胞，且成功率和灵敏度低；基于PCR的检测如RT-PCR、Q-PCR等易污染，假阳性率高，只能检测已知的断裂点，对未知或含少量转录本的AML1-ETO融合基因无法检出。FISH检测对病人外周血或骨髓的AML1-ETO融合基因具有极高的灵敏度和检测隐匿型易位的能力，其假阳性率远远低于PCR检测，能提供相对于核型分析更为可靠的分子遗传学证据，可用于预后判断、用药疗效、微小病灶残留及移植术后效果的监测。虽然，目前FISH检测方法得到了广泛的应用和改良，但目前基于FISH法的检测AML1-ETO融合基因检测中的探针条数多，混合存放时，易降解，导致检测结果的不稳定性，尤其容易出现假阴性检测结果，大大影响了检测结果的准确率和可信度。

为了保证试剂盒的稳定性，特别是在长途运输过程中由于环境温度的不稳定和路途颠簸等影响下还能保证良好的稳定性。目前急需开发出一种添加探针稳定剂的预混荧光探针工作液，可以在没有降解或副反应的情况下保存以简化所需操作，极大降低对使用者和使用环境的要求，提供便利，但与此同时，对试剂盒的稳定性提出了更高要求，增加了保证其溶液稳定性的难度，鉴于此，提出发明。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种基因探针稳定剂，可有效防止基因探针在存放过程中降解，延长其保存期，提高试剂盒的耐存储性，且能确保检测结果的可靠性。