[发明专利]利用红细胞DNA损伤信号预测血液病转归的方法及其应用

权利要求书

1.含RNase的染色试剂和核酸染色剂的组合在制备用于进行一种利用红细胞损伤信号预测血液病转归的方法的制剂中的用途，其中所述含RNase的染色试剂为含第一标记物标记的CD235a以及第二标记物标记的CD47，其中所述第一标记物不同于所述第二标记物，所述核酸染色剂为含Hoechst33342和Thiazole orange的1×PBS，并且所述方法包括以下步骤：

S1：准备血样本：获取抗凝血样本，按照1%体积比将所述抗凝血样本在室温环境下固定于1%-4%的多聚甲醛溶液当中，固定10-20分钟后，形成含有血样本的固定液；

S2：准备对照组和实验组：分别取用相同体积的固定液设置为第一对照组和第一实验组，所述第一对照组和所述第一实验组均在室温环境下300-400g离心，弃上清液，随后用1*PBS重悬清洗2-3次，得到处理过后的第二对照组和处理过后的第二实验组；

S3：染色第二实验组：取所述第二实验组加入Human FcR Binding，在4摄氏度下孵育15-20分钟，随后使用染色缓冲剂在室温避光环境下染色所述第二实验组，得到第三实验组，其中所述染色缓冲剂为所述含RNase的染色试剂以及核酸染色剂的组合，染色15-30分钟；

S4：重悬第二对照组：使用1*PBS重悬所述第二对照组，得到第三对照组；

S5：流式方法检测所述第三实验组以及所述第三对照组：将所述第三实验组和所述第三对照组放置于流式细胞仪中检测，得到分析结果；以及

S6：分析所述分析结果，其中

所述步骤S6进一步包括：

S61：选择含有所述CD235a的阳性细胞群体；

S62：在步骤S61的基础上选择CD47表达量处于TOP5%细胞群体；以及

S63：在步骤S62的基础上选择Hoechst33342和Thiazole orange双阳性的细胞群体，记录CD47表达量为TOP5%的细胞群体中Thiazole orange和Hoechst33342呈现双阳的细胞群体百分比，得到损伤信号。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，对应1ul的血样本使用0.1-0.15μg所述第一标记物标记的CD235a、0.03-0.1μg所述第二标记物标记的CD47、0.014-0.08 nmolHoechst33342和0.04-0.2μgThiazole orange的1×PBS。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述步骤S3中，所述第一标记物为APC，所述第二标记物为PE。

4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述血样本为骨髓或者外周血，所述血样本的体积为1-3ul。

5.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述流式细胞仪的记录个数为100000个、记录时间120s、样本流速30微升/分钟。

6.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述步骤S2中，离心时间为4-6分钟。