[发明专利]一种注射用rhTNK-tPA冻干制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种注射用rhTNK-tPA冻干制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:

A)分离纯化：取细胞培养收获液过滤后经一系列纯化步骤后得到纯化后的rhTNK-tPA；

B)配液：按相应的重量取纯化后的rhTNK-tPA，加入缓冲液BufferA稀释至目标浓度，搅拌均匀，调节pH值至7.2～7.8，进行除菌过滤和灌装与半加塞；

C)冻干：包括S1～S3步骤

S1、预冻阶段：在开始降温阶段，使制品在-15℃下预冻1～2h后，继续于-45℃下预冻2～5h；

S2、一次干燥/升华干燥过程：保持冷阱温度在-50℃以下，真空度为100～300μbar，依次在-35℃、-30℃、-25℃各干燥1～2h，然后于-20℃干燥4h，最后于-15℃一直持续到升华干燥结束，干燥总时间为25～30h；

S3、二次干燥/解吸干燥过程：保持冷阱温度在-50℃以下，真空度为100～300μbar，依次在-5℃、5℃各干燥1h，然后在板层设定温度38℃下干燥1～4h，使制品温度达到29～34℃，待制品温度稳定后，保持板层设定温度38℃不变，在小于50μbar的真空度下继续干燥4～10h，控制干燥总时间为10～15h；

D)轧盖：设置好轧盖参数，启动轧盖机轧盖，检查轧盖质量，挑出轧盖缺陷品。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述分离纯化具体步骤为：取细胞培养收获液经Blue Sepharose 6Fast Flow亲和层析后用洗脱液Ⅰ洗脱，洗脱后进行赖氨酸亲和层析，用洗脱液Ⅱ洗脱；洗脱后进行Capto Q阴离子层析，用洗脱液Ⅳ洗脱；洗脱后进行Sephadex G-25凝胶过滤层析，经洗脱液Ⅲ洗脱后得到纯化后的rhTNK-tPA。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述分离纯化具体步骤为：取细胞培养收获液经Blue Sepharose 6Fast Flow亲和层析后用洗脱液Ⅰ洗脱，洗脱后进行SephadexG-25凝胶过滤层析，用洗脱液Ⅲ洗脱；洗脱后进行赖氨酸亲和层析，用洗脱液Ⅱ洗脱，最后进行Capto Q阴离子层析，用洗脱液Ⅳ洗脱得到纯化后的rhTNK-tPA。

4.如权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述洗脱液Ⅰ由以下浓度的组分组成：20～100mM磷酸盐缓冲液、1～2M氯化钠溶液、2～5M尿素和0.04％聚山梨酯80，洗脱液的pH值为7.0～9.0，用量为2.0～4.0倍体积。

5.如权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述洗脱液Ⅱ由以下浓度的组分组成：20～100mM磷酸盐缓冲液、0.1～0.5M 6-氨基正己酸、0.1～0.5M精氨酸和0.04％聚山梨酯80，洗脱液的pH值为7.0～9.0，用量为1.5～3.0倍体积。

6.如权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述洗脱液Ⅲ由以下浓度的组分组成：0.1～0.5M精氨酸和0.04％聚山梨酯80，洗脱液的pH值为7.0～9.0，用量为0.5～1.5倍体积。

7.如权利要求2或3所述的制备方法，所述洗脱液Ⅳ由以下浓度的组分组成：20～100mM磷酸盐缓冲液、0.1～0.5M 6-氨基正己酸、0.1～0.5M精氨酸和0.04％聚山梨酯80，洗脱液的pH值为7.0～9.0，用量为1.5～3.0倍体积。

8.如权利要求1所述的制备方法，所述缓冲液BufferA由以下浓度的成分组成：50～55g/L精氨酸、0.01～0.04％(v/v)聚山梨酯80和磷酸18～20g/L，pH为7.4±0.1。

9.一种如权利要求1～8任一所述的制备方法制备得到的rhTNK-tPA冻干制剂。