[发明专利]一种Atg5瞬时沉默载体在审
| 申请号： | 201810458343.0 | 申请日： | 2018-05-14 |
| 公开（公告）号： | CN110484557A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 彭杰军;鲁宇文;燕飞;钱靖;郑红英;林林;程晔;陈剑平 | 申请（专利权）人： | 浙江省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66 |
| 代理公司： | 33283 杭州天昊专利代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 向庆宁<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 310021 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 沉默载体 细胞器 过氧化物酶体 双元表达载体 特异性沉默 基因沉默 瞬时表达 外源蛋白 有效抑制 植物细胞 靶基因 内质网 农杆菌 线粒体 构建 降解 质体 蛋白 细胞 基因 缓解 积累 分析 | ||
1.一种用于沉默Atg5基因的沉默载体，其特征在于，该沉默载体包括元双表达载体以及插入所述双元表达载体的SL片段和SS片段。
2.根据权利要求1所述的沉默载体，其特征在于，其构建方法包括如下步骤：(1)根据Nb-Atg5基因序列设计SL片段和SS片段扩增引物；(2)PCR扩增产物分别构建T-SL、T-SS载体；(3)双酶切T-SS和双元表达载体，连接得到重组质粒；(4)双酶切步骤(3)得到的重组质粒和T-SL，进行连接；(5)将步骤(4)得到的连接产物转化至农杆菌感受态细胞，筛选得到阳性克隆，提取质粒，得到沉默载体。
3.根据权利要求1所述的沉默载体，其特征在于，所述SL片段的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述SS片段的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
4.根据权利要求1所述的沉默载体，其特征在于，所述SL片段由Atg5基因序列的第63-552位核苷酸组成，包括490bp碱基；所述SS片段由Atg5基因序列的第63-476位核苷酸组成，包括414bp碱基。
5.根据权利要求1所述的沉默载体，其特征在于，所述SS片段与双元表达载体的连接为反向连接；所述SL片段与双元表达载体的连接为正向连接。
6.根据权利要求2所述的沉默载体构建方法，其特征在于，所述SL片段引物的碱基序列如下：
正向引物序列是5’-GGGATCCACTACAGATTCACCTTCATAAA-3’；
反向引物序列是5’-GGGTACCATCCACTAATAGGCCAAGTTTAA-3’；
所述SS片段引物的碱基序列如下：
正向引物序列是5’-GGGTACCCAGAGTTCTAATTGGTCAGGTT-3’；
反向引物序列是5’-GGAGCTCACTACAGATTCACCTTCATAAA-3’。
7.一种Atg5瞬时沉默载体在缓解细胞器定位的蛋白降解方面的用途，其特征在于，该沉默载体能够作用于细胞器区域，促进细胞器定位的外源蛋白表达。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江省农业科学院，未经浙江省农业科学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810458343.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
