[发明专利]纳米金笼复合物及其在制备检测人尿液或血液中的cMyBP-C的试剂盒中的应用

说明书

本发明公开一种纳米金笼复合物及其制备方法和在制备检测人尿液或血液中的cMyBP‑C试剂盒中的应用。纳米金笼复合物与一对抗人心肌球蛋白C单抗BT09和BT10共价结合，形成快速检测人尿液或血液中的cMyBP‑C的试剂盒。本发明使用纳米金笼复合物代替目前胶体金试纸条常用的球形纳米颗粒。应用于人血和/或尿cMyBP‑C检测敏感性和特异性极高，在基于白色背景下能比球形金纳米颗粒产生更好的分辨光信号。应用特定条件下（形状、尺寸）正方体中空纳米晶体与DNA和蛋白质共价键结合机制，生物素标记的单链DNA连接二种尺寸的纳米抗体，较胶体金纳米球POCT产品增强检测信号达5000~10000倍。结果易观察，灵敏度达到100fg/mL，15分钟内就能判读结果，具有良好的稳定性和重复性。

技术领域

本发明属于生物技术应用领域，具体涉及一种纳米金笼复合物及其制备方法和应用，尤其涉及该纳米金笼复合物在制备血和/或尿液心脏肌球蛋白结合蛋白C检测试纸条方面的应用。

背景技术

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)和/或损伤(myocardialinjury,MCI)是一类高发病率的临床重大疾病。欧美、中国乃至全球人群中AMI、MCI的死亡率、住院和就诊花费均居前列。心肌坏死生物标志物心肌肌钙蛋白(cTn)T/I是目前诊断AMI、危险度分层的首选标志物(Nat Rev Cardiol.2012 Nov；9(11):620-633)。但值得注意的是，血液cTn浓度是在心肌损伤后6-8小时才开始增高，16-18小时左右达峰值，因此胸痛发作时间＜6h的AMI患者，其cTn升高并不明显，缺乏诊断敏感性。近年新一代高敏感方法检测cTn(hs-cTn)相继问世，引起关注，可在胸痛＜3h检测增高，但因新一代高敏感方法可在大约99％的表面健康人群中也可观察到，增高了假阳性结果(Swiss Med Wkly.2011 May10；141:w13202.Intern Emerg Med.2017Mar；12(2):147-155.中华内科杂志2015,54(10):899-904)。其他如长跑、肾脏疾病等非心脏因素也可以引起cTn增高。目前其他心肌损伤生物标志物如肌红蛋白、CK-MB等缺乏敏感性或者特异性。在此背景下，寻找特异性更高、出现时间更早的AMI标志物具有十分重要的临床意义。

心脏肌球蛋白结合蛋白C(cMyBP-C)是心脏组织含量最丰的蛋白质之一(位列心脏2300个蛋白质的第19位)，其总量分别是心脏cTnI及cTnT 2倍多(cTnI及cTnT分别位列第118位及92位，Mol Cell Proteomics.2009 Dec；8(12):2687-99)。cMyBP-C的分子量约140KD，位于心肌粗肌丝肌球蛋白头部的横桥处，是调节心肌收缩的关键蛋白质。cMyBP-C蛋白质N端与其他横纹肌肌球蛋白结合蛋白C不同，是心脏组织特异表达。急性心肌损伤、AMI状态下，心肌受损，其N端约40KD片断释放入血，从而使得血液cMyBP-C浓度升高，cMyBP-C成为自cTn以来最有前途的心肌损伤生物标志物。

发明内容

发明目的：为达到从AMI和/或急性心肌损伤病人血液和/尿液中快速检测cMyBP-C的目的，近年即时检验(point-of-care testing,POCT)快速检测心脏标志物发展迅速，包括胶体金技术，采用免疫层析双抗体夹心法原理，利用胶体金可以牢固吸附在抗体的表面而不影响抗体的活性，当标记抗体与抗原反应聚集到一定浓度时，可以直接呈现颜色，可直接定性进行标志物浓度判断，结合专用阅读仪可达到半定量结果。整个检测过程可控制在15分钟内。目前尚无cMyBP-C快速检测试剂盒的专利或产品。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种纳米金笼复合物，所述纳米金笼复合物是通过中空正方体金纳米粒子与特定单链DNA以及显色抗体鼠抗人cMyBP-C抗体BT09相连接而成的复合物。

其中，上述特定单链DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:4。