[发明专利]纳米金笼复合物及其在制备检测人尿液或血液中的cMyBP-C的试剂盒中的应用有效
申请号: | 201810449820.7 | 申请日: | 2018-05-11 |
公开(公告)号: | CN108918857B | 公开(公告)日: | 2020-08-07 |
发明(设计)人: | 张寄南;张雷 | 申请(专利权)人: | 南京博天科智生物技术有限公司 |
主分类号: | G01N33/532 | 分类号: | G01N33/532;G01N33/558;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/58;B82Y30/00;B82Y15/00 |
代理公司: | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人: | 王艳 |
地址: | 211100 江苏省南京市江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 纳米 复合物 及其 制备 检测 尿液 血液 中的 cmybp 试剂盒 应用 | ||
1.一种纳米金笼复合物,其特征在于,所述纳米金笼复合物是通过中空正方体金纳米粒子与特定单链DNA以及显色抗体鼠抗人cMyBP-C抗体BT09相连接而成的复合物,所述特定单链DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2 或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示,纳米金笼标记物包含有显色抗体鼠抗人cMyBP-C抗体BT09,所述特定单链DNA长度为30-80bp,特定单链DNA 3'端标有生物素,特定单链DNA5’端连有巯基,所述纳米金笼复合物的尺寸为10-16 nm和40-60 nm;
所述的纳米金笼复合物的制备方法,包括以下步骤:
1)纳米金笼溶液的制备:用去离子水制备HAuCl4溶液,在室温下用注射泵在HAuCl4溶液中逐滴加入柠檬酸,之后在继续搅拌的情况下,待颜色变为红色后离心去除上清,获得不同尺寸的中空正方体金纳米晶体,然后用去离子水重悬中空正方体金纳米晶体,离心除过多的Au3+ 离子,去离子水重悬沉淀,加入5~20mg/ml的PVP单体及0.1% Tween得到纳米金笼溶液;
2)用0.1 M K2CO3调节纳米金笼溶液 pH8.5-9.0;将特定单链DNA与纳米金笼溶液联接反应6-8小时,加进PVP单体使其终浓度为0.2-1.0%,用2 M NaCl,20 mM phosphate调节pH至7.4得到纳米金标记复合物;
3)纳米金笼复合物的制备:用K2CO3调节纳米金标记复合物至pH为7.4-9.0,于纳米金标记复合物中逐滴加入显色抗体鼠抗人cMyBP-C抗体BT09得到纳米金笼复合物。
2.权利要求1所述的纳米金笼复合物在制备检测人尿液或血液中的cMyBP-C试剂盒中的应用。
3.一种心脏肌球蛋白结合蛋白C检测试纸条,其特征在于,所述检测试纸条上设有权利要求1所述的纳米金笼复合物。
4.权利要求3所述的心脏肌球蛋白结合蛋白C检测试纸条的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)纳米金笼复合物的制备:按照权利要求1所述的方法制备得到纳米金笼复合物;
2)纳米材料垫制备及喷垫:将纳米金笼复合物喷印在纳米材料垫上;
3)检测线制备:将单克隆抗体BT10划在醋酸纤维膜上,制成检测线;
4)质控线制备:将羊抗鼠IgG抗体划在醋酸纤维膜上,制成质控线;
5)试纸条装配;
6)检测。
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