[发明专利]一种抗BCMA的嵌合型抗原受体及其制备方法

说明书

本发明涉及一种抗BCMA的嵌合型抗原受体及其制备方法，本发明通过分离患者自身的T细胞，用编码CAR的慢病毒载体进行编程，从而获得能够特异性识别和清除BCMA阳性肿瘤细胞的抗BCMA CAR‑T细胞。本发明解决了传统化疗药物缺乏特异性，杀伤肿瘤细胞的同时也杀伤健康组织细胞的问题。

技术领域

本发明自体免疫细胞治疗技术领域，具体涉及一种治疗MM(骨髓瘤细胞)的抗BCMA的嵌合型抗原受体及其制备方法。

背景技术

恶性肿瘤(癌症)严重危害人类的生命健康。多发性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)是B淋巴细胞异常增殖的恶性肿瘤性疾病，占所有癌症的1％，在所有血液病中占10％。在血液系统恶性肿瘤中，多发性骨髓瘤属于第二常见的病种。由于该疾病复发频繁，且伴有多种相关并发症，因此一直以来被视为绝症。随着多发性骨髓瘤与其他B细胞相关疾病的蔓延，医药界急于研发针对B细胞的特效疗法。传统化疗药物缺乏特异性，杀伤肿瘤细胞的同时也杀伤健康组织细胞，其疗效与不良反应呈正相关。传统化疗药物缺乏特异性，杀伤肿瘤细胞的同时也杀伤健康组织细胞，其疗效与不良反应呈正相关。

BCMA是肿瘤坏死因子超家族成员，主要表达在浆细胞、成熟B细胞及骨髓瘤细胞表面，是浆细胞系肿瘤和多发性骨髓瘤(Multiplemyeloma,MM)的特异性抗原。CAR由特异性识别BCMA的鼠单链抗体可变片段(single-chainvariable fragment,scFv)与来自CD28、CD3ζ的细胞内信号传导结构域融合组成，CD3ζ启动T细胞活化和抗肿瘤活性，通过释放颗粒酶、穿孔素及多种细胞因子引发BCMA阳性细胞的凋亡；CD28胞内信号传导结构域增强anti-BCMACAR-T细胞在体内的扩增和存活能力。当CAR结合BCMA阳性细胞时，其传递信号以促进anti-BCMACAR-T细胞的活化、增殖，并介导靶细胞的清除。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗BCMA的嵌合型抗原受体及其制备方法，本发明通过分离患者自身的T细胞，用编码CAR的慢病毒载体进行编程，从而获得能够特异性识别和清除BCMA阳性肿瘤细胞的抗BCMACAR-T细胞。

为了达成上述的目的，本发明提供了一种嵌合型抗原受体基因CD8α-VL-linker-VH-CD28TM-CD28-CD3ζ，其包含依次串联的能够结合抗原的胞外结构域、跨膜结构域和至少一个胞内结构域；所述胞外结构域由CD8信号肽、anti-BCMA轻链可变区(VL)、连接子(linker)、anti-BCMA重链可变区(VH)及CD8铰链区(hinge)串联构成；所述跨膜结构域为CD8跨膜区(TM)；所述胞内结构域由CD28胞内结构域及CD3ζ胞内结构域串联构成。

进一步地，其中所述CD3ζ胞内结构域为CD3ζ细胞毒性功能区。

本发明还提供了上述嵌合型抗原受体基因CD8α-VL-linker-VH-CD8hinge-CD28TM-CD28-CD3ζ的制备方法，包括：将CD8信号肽、anti-BCMA轻链可变区(VL)、连接子(linker)、anti-BCMA重链可变区(VH)、CD8铰链区、CD8跨膜区(TM)、CD28胞内结构域及CD3zeta胞内结构域通过基因合成技术直接合成。

本发明还提供了一种含有PLVX-EF1α-IRES-puro慢病毒表达载体的重组质粒PLVX-BCMA-01。

本发明还提供了上述重组质粒PLVX-BCMA-01的制备方法，包括：将上述嵌合型抗原受体基因CD8α-VL-linker-VH-CD8hinge-CD28TM-CD28-CD3ζ构建在PLVX-EF1α-IRES-puro慢病毒表达载体上，以形成重组质粒PLVX-BCMA-01。

本发明还提供了一种抗BCMA的嵌合型抗原受体包括依次串联的scFv抗体(单链抗体)、hinge铰链区、CD8跨膜区(TM)、CD28胞内结构域(ICD)及CD3ζ胞内结构域。