[发明专利]GmMDH12基因在促进大豆结瘤固氮能力方面的应用

权利要求书

1.核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的GmMDH12 基因在增强大豆根瘤苹果酸合成方面的应用。

2.权利要求1中所述的GmMDH12 基因在促进大豆结瘤固氮能力方面的应用。

3.权利要求1中所述的GmMDH12基因在增强大豆植物根系结瘤能力和/或生物固氮能力方面的应用。

4.一种增强大豆植物根系结瘤能力和/或生物固氮能力的方法，其特征在于，将权利要求1中所述的GmMDH12基因在大豆中过表达。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，将权利要求1中所述的GmMDH12基因连接到载体PTF101S上得超量表达载体后，转入农杆菌K599中，并利用农杆菌介导大豆转基因复合植株进行转化，获得转基因大豆。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤如下：

S1.构建超量表达载体

以大豆根瘤cDNA为模板，用SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示上下游特异引物PCR扩增权利要求1中所述的GmMDH12基因序列；

PCR扩增片段回收测序无误后，通过Sac I 和Xba I对扩增片段及目的载体PTF101S分别进行双酶切后，将扩增片段连接到目的载体PTF101S上，得到表达载体；

S2.转化：随后通过冻融法将构建好的表达载体转入到农杆菌K599中，利用农杆菌介导大豆转基因复合植株进行转化，得到转基因复合植株。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，得到的转基因复合植株需经过验证：提取转基因复合植株根系和根瘤RNA，反转录成cDNA，通过定量PCR检测权利要求1中所述的GmMDH12基因表达效果。