[发明专利]单核细胞增生李斯特氏菌标准样品及其制备方法

说明书

本发明公开了一种单核细胞增生李斯特氏菌标准样品及其制备方法，属于微生物学检测方面的质量控制领域。标准样品包括目标菌和背景菌群，所述目标菌为单核细胞增生李斯特氏菌，所述背景菌群由英诺克李斯特氏菌，绵羊李斯特氏菌，金黄色葡萄球菌组成。本发明均匀性、稳定性符合标准样品要求，可以最大程度保证测试样品的稳定性，从满足特殊运输的条件着手，通过特殊工艺的研究、稳定性和均匀性的研究等形成一套完善的标准样品制备技术，适合于制备符合标准样品要求的猪肉中单核细胞增生李斯特氏菌标准样品，适用于实验室的能力验证、质量控制、方法验证等用途。

技术领域

本发明提供一种猪肉作为主要基质的单核细胞增生李斯特氏菌标准样品及其制备方法，属于微生物学检测方面的质量控制领域。

背景技术

猪饲养简易，猪肉又具有骨细筋少肉多的特点，是世界范围内主要的肉类食品。猪肉富含蛋白质及脂肪、碳水化合物、钙、铁、磷等营养成分，经过烹调加工后肉味特别鲜美，是我国餐桌上重要的动物性食品之一。我国猪肉的主要消费形式是经过加工的冷鲜肉，由于猪肉营养物质和水分含量都比较高，所以很容易受到微生物的污染。在屠宰过程中，猪肉不可避免要携带来自环境和动物肠道、皮毛等部位的大量微生物，所以生产加工和储藏过程中，如果处理不当很容易造成微生物的二次污染。受微生物污染的猪肉，如果携带致病菌，或者迅速繁殖，可能会对公众健康构成潜在的威胁，因此，提高产品质量、加强猪肉微生物的检测和控制对保障食品安全至关重要。

单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)简称单增李斯特菌，是一种人畜共患病的食源性致病菌，人类感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，并且在4℃的条件下仍可生长繁殖，是威胁人类健康的主要病原菌之一，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。因此，制备单核细胞增生李斯特氏菌标准样品，尤其是有合适食品基质的标准样品对实验室能力验证、质量控制、方法验证等都有深远的意义。在单核细胞增生李斯特氏菌标准样品中，如果目标菌易发生变化(繁殖或死亡等)，会导致标准样品均匀性和稳定性较差，影响标准样品的使用效果和保质期。因此，在制备猪肉中单核细胞增生李斯特氏菌标准样品时，需要综合考虑选用标准菌株的生化特性，冻干的工艺条件，冻干前对目标菌的低温刺激和基质中保护剂的添加等交互的关系，以达到最佳的冻干效果。

单核细胞增生李斯特氏菌最常见的污染食品为肉及肉制品，猪肉是我国最主要肉食消费品，所以猪肉中单核细胞增生李斯特氏菌的检测直接关系猪肉的卫生质量和致病风险。制备均匀性和稳定性良好的以猪肉为基质的单核细胞增生李斯特氏菌标准样品，可以避免单核细胞增生李斯特氏菌检验的随意性和不确定性，对实验室进行能力验证、方法验证、仪器校准、测试结果的质量控制等都具有特殊重要的意义。

发明内容

本发明是将猪肉作为一种基质，向其中加入一定量的单核细胞增生李斯特氏菌标准菌株，经过一系列冷冻干燥的工艺处理，同时加入针对单核细胞增生李斯特氏菌的保藏干燥保护剂，制成猪肉中单核细胞增生李斯特氏菌标准样品，目的是克服单核细胞增生李斯特氏菌标准样品中目标菌的活菌数在运输、储藏和检测等过程中容易发生变化的问题，提供一种均匀性、稳定性符合标准样品要求的猪肉中单核细胞增生李斯特氏菌标准样品，并确保该制备方法的工艺简单可行，成功率高。

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案是：

本发明提供了一种单核细胞增生李斯特氏菌标准样品，包括目标菌和背景菌群，所述目标菌为单核细胞增生李斯特氏菌，所述背景菌群由英诺克李斯特氏菌，绵羊李斯特氏菌，金黄色葡萄球菌组成。

本发明的标准样品以猪肉、丙酮酸钠、维生素C和无菌生理盐水为基质，其中丙酮酸钠的浓度为500mg/kg、维生素C的浓度为500mg/kg。在本领域中，标准样品经常发生目标菌繁殖或死亡的现象，大大影响标准样品的均匀性和稳定性。为克服该现象，本发明在基质中加入特制的干燥保护剂，浓度为500mg/kg。