[发明专利]单核细胞增生李斯特氏菌标准样品及其制备方法

权利要求书

1.单核细胞增生李斯特氏菌标准样品，其特征是：包括目标菌和背景菌群，所述目标菌为单核细胞增生李斯特氏菌，所述背景菌群由英诺克李斯特氏菌，绵羊李斯特氏菌，金黄色葡萄球菌组成。

2.根据权利要求1所述的标准样品，其特征是：所述样品以猪肉、丙酮酸钠、维生素C和无菌生理盐水为基质，其中丙酮酸钠的浓度为500 mg/kg、维生素C的浓度为500mg/kg。

3.根据权利要求2所述的标准样品，其特征是，基质中还加入干燥保护剂，浓度为500mg/kg；

所述的干燥保护剂成分为：脱脂乳粉，谷氨酸钠、羧甲基纤维素钠，瓜尔胶、海藻酸钠。

4.根据权利要求1所述的标准样品，其特征是：脱脂乳粉，谷氨酸钠、羧甲基纤维素钠，瓜尔胶、海藻酸钠的重量比为：5:1-2:1-3:2-5:1-3。

5.根据权利要求1所述的标准样品，其特征是：所述样品中目标菌的目标浓度为10²~10³CFU/g，背景菌群的目标浓度为10³~10⁴CFU/g。

6.制备权利要求1所述的菌标准样品的方法，其特征是：包括样品基质的选择及制备、添加菌株的选择、菌株复苏传代、增菌、对目标菌的低温刺激、菌悬液配制、样品分装、真空冷冻干燥和包装、储存等，具体过程为：

（1）样品基质的选择及制备

选购猪的脊椎骨内侧的条状嫩肉，即猪的里脊肉，要求其色泽红润，肉质透明，质地紧密，富有弹性，手按后能够很快复原，并除去连在肉上的筋和膜，只保留质嫩无筋的瘦肉；

将猪肉混合搅匀，每5 kg搅碎猪肉中加1 kg丙酮酸钠和1 kg维生素C溶液，丙酮酸钠的浓度为500 mg/kg、维生素C的浓度为500 mg/kg，混匀制成肉浆；

（2）添加菌株的选择

根据权利要求1选择单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogens）ATCC13932，英诺克李斯特氏菌（Listeriainnocua）ATCC33090，绵羊李斯特氏菌（Listeria ivanuii）ATCC BAA-139，金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC29213；

（3）菌株复苏传代

将标准菌株接种到营养琼脂斜面培养基上，在36±1℃下使其复苏和生长，并对复苏的菌株进行鉴定；

（4）增菌

将鉴定后符合要求的标准菌株接种到营养肉汤中，在36±1℃下进行培养，目标菌培养至对数生长期末，背景菌群培养至稳定期，备用；

（5）低温刺激

将对数生长期的目标菌放到4±1℃下继续培养，培养至稳定期，备用；

（6）菌悬液的配制

将上述过程（4）和（5）得到的菌液，用无菌生理盐水进行梯度稀释，稀释到目标菌的目标浓度为10⁵~10⁶CFU/mL，背景菌群的目标浓度为10⁶~10⁷CFU/mL，将目标菌和背景菌群的稀释液1:1混合均匀，得到备用混合菌液；

（7）样品分装

向步骤（1）得到的猪肉肉浆中加入步骤（6）得到的混合菌液7 mL，加入干燥保护剂，进一步混合，使用搅拌器不断搅拌，确保菌液和肉糜混合均匀，将混合均匀的肉糜分装到样品瓶中，加上瓶塞，但要留有空隙，不要盖实，每瓶重量为1.5 g；

（8）真空冷冻干燥和包装

将装有肉糜的样品瓶开盖放入冻干机中，真空冷冻干燥48~50 h，当样品冻干程序结束后，直接在冻干机内进行压塞，关闭机器，进行放气，取出样品时样品瓶内为真空状态；

（9）储存

取出的样品再加盖金属盖进行密封，放置在-18℃条件下避光保存，从全部样品中随机挑选样品进行均匀性和稳定性实验。