[发明专利]鸭性别鉴定用RT-PCR引物、试剂盒及鉴定方法在审
| 申请号： | 201810402205.0 | 申请日： | 2018-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN108384845A | 公开（公告）日： | 2018-08-10 |
| 发明（设计）人： | 龚萍;杨宇;叶胜强;杨永平;王丽霞;陈星;凌明湖;钱运国;刘武;周莉;王莲芳;华娟 | 申请（专利权）人： | 武汉市农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6879 | 分类号： | C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 杨立;冯瑛琪 |
| 地址： | 430000 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 性别鉴定 试剂盒 核苷酸序列 重要意义 引物 样本 鉴别 | ||
1.一种鸭性别鉴定用RT-PCR引物，其特征在于，包括
上游引物DWL，其序列为SEQ ID NO:1；
下游引物DWR，其序列为SEQ ID NO:2。
2.一种鸭性别鉴定用试剂盒，其特征在于，包含如权利要求1所述鸭性别鉴定用RT-PCR引物。
3.根据权利要求2所述的一种鸭性别鉴定用试剂盒，其特征在于，还包括用于扩增β-actin内参基因的内参引物，所述内参引物包括上游引物actL和下游引物actR，其序列分别为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。
4.根据权利要求3所述的一种鸭性别鉴定用试剂盒，其特征在于，还包括TaqDNA聚合酶、buffer缓冲液和dNTP。
5.一种鸭性别鉴定方法，其特征在于，使用权利要求4所述的鸭性别鉴定用试剂盒，该方法为：提取待测样品的总RNA，用所述鸭性别鉴定用RT-PCR引物、内参引物、TaqDNA聚合酶、buffer缓冲液和dNTP进行RT-PCR,然后采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，当扩增产物中出现363bp和255bp的特异性扩增条带时判定为雌性鸭，当扩增产物中没出现363bp和255bp的特异性扩增条带时判定为雄性鸭。
6.根据权利要求5所述的一种鸭性别鉴定方法，其特征在于，所述待测样品为待测鸭的胸肌、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胃、小肠、睾丸、卵巢、血液组织中的一种或几种。
7.根据权利要求5所述的一种鸭性别鉴定方法，其特征在于，所述RT-PCR过程中，cDNA扩增的反应程序为：98℃预变性2分钟，98℃变性10秒，59℃复性30秒，72℃延伸1分钟，共35个循环，最后72℃延伸5分钟。
8.根据权利要求5所述的一种鸭性别鉴定方法，其特征在于，所述363bp的特异性扩增条带的核苷酸序列为SEQ ID NO:5。
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