[发明专利]一种用于西瓜杂交品种纯度鉴定的SSR引物及方法

说明书

本发明公开了一种用于西瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物，所述引物包括引物CISSR09643的上游引物CISSR09643‑F和下游引物CISSR09643‑R，所述上游引物CISSR09643‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物CISSR09643‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开一种用于西瓜杂交种子纯度鉴定的方法，用于西瓜品种博琳、安德、天福二号、黄凤凰杂交种子纯度鉴定；通过本发明引物及方法，只需简单提取西瓜叶片基因组DNA，然后进行PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳，即可有效的鉴定博琳、安德、天福二号、黄凤凰4个西瓜杂交种子的纯度，能够替代传统杂交种子纯度鉴定的方法，大大缩短鉴定时间，节省鉴定成本，提高鉴定准确度，具有较强的商业应用价值。

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，具体涉及一种用于西瓜杂交品种纯度鉴定的SSR引物及方法。

背景技术

西瓜为异花授粉植物，在我国各地广泛栽培种植。近年来，西瓜杂交品种在我国迅速普及推广，栽培面积逐年扩大，已成为增加农民收人和促进农村经济发展的重要作物之一。

利用杂种优势，培育一代杂交西瓜品种是目前西瓜育种的主要方法。在西瓜杂交制种过程中，由于人工去雄不及时、不彻底等原因，常会出现假杂交种，导致种子遗传纯度下降，给生产造成巨大的经济损失。西瓜杂交种种子在包装销售前必须通过纯度检测，这对保证种子质量和提高生产效益具有重要意义。当前西瓜纯度鉴定主要方法是传统的田间小区种植鉴定法，整个鉴定过程周期长、费时费工、占地面积较大，且易受环境影响导致鉴定结果不准确，不能满足当年生产需要。因此，优良一代杂交种纯度的快速、准确鉴定成为西瓜生产中最为迫切解决的问题之一。

随着测序技术的迅速发展， 使得从基因组水平上检测杂交种纯度成为可能。分子标记技术能够从DNA 水平上检测子代与亲本间的微小差异，不受时空限制，可以大大缩短检测时间。在真核生物基因组中，SSR 标记具有数量丰富、分布均匀、操作方便、共显性遗传、稳定性好等有优点，是进行杂交种纯度鉴定的理想标记类型。提取西瓜亲本及其杂交后代的基因组已经完成测序，有很多开发的SSR标记，分子标记技术的发展为高效、准确检测西瓜品种纯度提供技术支撑。

发明内容

本发明针对目前西瓜杂交种子纯度鉴定大多靠田间表型观察方法存在受季节限制大、鉴定所需时间长等缺陷，本发明的第一个目的在于提供一种用于西瓜杂交种子纯度鉴定的SSR 引物，该引物能够在对应父母本中产生特异性标记，特异性强；本发明的第二个目的在于提供一种西瓜杂交种子纯度的鉴定方法，用于鉴定于博琳、安德、天福二号、黄凤凰4种西瓜杂交种子纯度，该方法利用上述SSR 引物，能快速、准确、有效的鉴定4种西瓜杂交种子纯度；

本发明所采用的技术方案是：

一种用于西瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物，所述引物包括引物CISSR09643的上游引物CISSR09643-F和下游引物CISSR09643-R，所述上游引物CISSR09643-F 的核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示，所述下游引物CISSR09643-R 的核苷酸序列如SEQ ID NO.2 所示。

上述引物的具体核苷酸序列如下：

上游引物CISSR09643-F：5'- TTGTTTGACGAGATTCACGC-3' (SEQ ID NO.1)

下游引物CISSR09643-R：5'- GGACCGGAAAGATGAGACAG -3' (SEQ ID NO.2)

一种用于西瓜杂交种子纯度鉴定的方法，包括以下步骤：

（1）提取西瓜亲本或其杂交后代的基因组DNA；

（2）利用权利要求1所述的引物CISSR09643对提取西瓜亲本或其杂交后代的基因组DNA进行PCR扩增；