[发明专利]一种食源性益生菌的特异性荧光标记方法及其体内应用

权利要求书

1.一种食源性益生菌的特异性荧光标记方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)通过溶剂热-高温煅烧法，制备具备近红外荧光和超长余辉性质的Cr³⁺掺杂的镓锗酸锌长余辉荧光纳米探针；

(b)通过抗体表面功能化，实现对于目标益生菌的特异性荧光标记。

2.根据权利要求1所述的一种食源性益生菌的特异性荧光标记方法，其特征在于，所述步骤(a)制备Cr³⁺掺杂的镓锗酸锌长余辉纳米探针的过程如下：

(1)将金属离子溶液按照一定比例混合并调节pH使其发生共沉淀反应从而得到反应液；

(2)将步骤(1)所制备的反应液在聚四氟乙烯反应釜中进行溶剂热反应；

(3)将步骤(2)中产物离心洗涤并使用玛瑙研钵粗研后在马弗炉中煅烧；

(4)将步骤(3)所制得的固体粉末研磨并离心筛选得到粒径均一的长余辉纳米探针。

3.根据权利要求2所述的一种食源性益生菌的特异性荧光标记方法，其特征在于，所述步骤(1)各金属元素比例按照纳米材料的化学结构式配制Zn_1.25Ga_1.5Ge_0.25O₄:0.5％Cr³⁺，溶剂为2mL油酸和15mL甲苯，pH调节使用叔丁胺，最终pH为7.5。

4.根据权利要求2所述一种食源性益生菌的特异性荧光标记方法，其特征在于，所述步骤(2)在聚四氟乙烯反应釜中溶剂热反应温度为120℃，反应时间为24小时。

5.根据权利要求2所述一种食源性益生菌的特异性荧光标记方法，其特征在于，所述步骤(3)在马弗炉中煅烧温度为750℃，反应时间为5小时。

6.根据权利要求1所述的一种食源性益生菌的特异性荧光标记方法，其特征在于，所述步骤(b)通过抗体表面功能化标记益生菌的过程如下：

(1)将步骤(a)得到的Cr³⁺掺杂的镓锗酸锌长余辉荧光纳米探针分散到2mL N,N-二甲基甲酰胺中，磁力搅拌30分钟；

(2)将3-氨丙基三乙氧基硅烷加入到步骤(1)的溶液里，磁力搅拌8小时；

(3)将步骤(2)得到溶液离心去除未反应的3-氨丙基三乙氧基硅烷，然后加入抗体和催化剂，室温避光振摇30分钟，离心洗涤；

(4)将步骤(3)得到溶液与目标益生菌液混合，孵育。

7.根据权利要求6所述的一种食源性益生菌的特异性荧光标记方法，其特征在于，所述步骤(2)中3-氨丙基三乙氧基硅烷使用量为20μL。

8.根据权利要求6所述的一种食源性益生菌的特异性荧光标记方法，其特征在于，所述步骤(3)中所使用的抗体为革兰氏阳性菌LTA抗体，将1mg抗体溶解于10mL PBS进行修饰，修饰方法为EDC-NHS催化羧基-氨基反应。

9.根据权利要求6所述的一种食源性益生菌的特异性荧光标记方法，其特征在于，所述步骤(4)中孵育条件为37℃下轻摇孵育1小时。

10.一种食源性益生菌的特异性荧光标记方法的体内应用，其特征在于，通过口服进入生物体内，借助长余辉纳米探针体外激发的光学生物成像技术，实时监控益生菌在体内的代谢分布过程。