[发明专利]一种快速筛查食源性病原菌的方法

权利要求书

1.一种快速筛查食源性病原菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）反应体系组成：支持目标菌生长的营养成分、干扰菌抑制剂及细菌特异性酶反应底物；

（2）试剂制备：分为培养液制备和显色剂制备；

（3）应用方法：根据细菌特异性酶反应特点，底物可在培养前加入或在需要判断结果时加入；

（4）结果分析：包括实时观察法和最终结果观察法。

2.如权利要求1所述的快速筛查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的反应体系中支持目标菌生长的营养成分由以下重量份数：蛋白质水解产物5~20份，无机盐和微量元素0.001~5份，碳水化合物5~15份，促生长因子0.001~1份。

3.如权利要求1或2所述的快速筛查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述蛋白质水解产物为蛋白胨、酵母浸粉、牛肉浸粉单一或组合成分。

4.如权利要求1或2所述的快速筛查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述促生长因子为调节微生物正常生长代谢所必需的、自身不能合成的有机物，除了维生素外，还包括碱基、嘌呤、嘧啶、生物素和烟酸以及氨基酸营养缺陷突变株所需要的氨基酸。

5.如权利要求1所述的快速筛查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的反应体系中干扰菌抑制剂为胆汁提取物、化学抑菌剂、染料抑菌剂和抗生素。

6.如权利要求1所述的快速筛查食源性病原菌的方法，其特征在于所述细菌特异性酶反应底物为一种或多种试卤灵类底物，包括以下化合物：试卤灵-β-D-半乳糖苷、试卤灵-α-D-半乳糖苷、试卤灵-β-D-葡萄糖苷、试卤灵-α-D-葡萄糖苷、试卤灵-β-D-葡萄糖醛酸苷、试卤灵-β-D-葡萄糖醛酸甲脂、试卤灵-丁酸、试卤灵-辛酸脂，其单独或混合其他荧光底物配成相关显色剂。

7.如权利要求1所述的快速筛查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的试剂制备包括培养液的制备和相应显色剂的制备：

（1）培养液制备：按照配方将支持目标菌生长的各营养成分和除抗生素以外的干扰菌抑制剂加入去离子水中，搅拌溶解，调节pH值至要求值，121℃高压灭菌15min，待冷却至45~55℃，加入相应抗生素，备用；

（2）显色剂制备：按照配方将细菌特异性酶反应底物溶解到二甲基亚砜或正庚烷中制成显色剂母液，以过滤法除菌，分装于无菌的离心管内，每管1mL，备用。

8.如权利要求1所述的快速筛查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的应用方法：如果是实时观察法，每1000mL培养液加入1mL显色剂，混匀，分装至无菌带盖玻璃瓶或合适容器内，每瓶9mL混合培养液；如果是最终结果观察法，则直接分装培养液，每瓶9mL；无菌操作称取1g(mL)样品，直接置于分装的培养液内，在适宜温度下培养5~8h后，加入10μL显色剂；每个样品做3遍，配套制备阴性对照组和阳性对照组。

9.如权利要求1所述的快速筛查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的结果分析：使用实时观察法检测时，培养一段时间后直接观察或利用荧光分光光度计，573nm波长激发后，检测585nm处荧光值；当反应体系变成亮粉色或585nm处有荧光产生时，证明培养物中含有目标菌；可以根据体系颜色变化的时间，估算出样品中目标菌的数量级，实现半定量。

10.如权利要求1所述的快速筛查食源性病原菌的方法，其特征在于，所述的结果分析：使用最终结果观察法检测时，培养一段时间后，向反应体系中滴加10μL显色剂后，混匀观察或利用荧光分光光度计，573nm波长激发后，检测585nm处荧光值；当反应体系在5min内变成亮粉色或585nm处有荧光产生时，证明培养物中含有目标菌。