[发明专利]唾液酸寡糖-磁纳米酶及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及流感病毒检测领域，具体涉及一种唾液酸寡糖‑磁纳米酶及其制备方法和应用。本发明提供式Ⅰ或式Ⅱ所示的唾液酸寡糖‑磁纳米酶，所述式Ⅰ和式Ⅱ中，所述x为1‑3的整数，所述m为0‑11的整数；所述Ac为乙酰基，所述R¹为羟基或乙酰胺基，所述R²为氢或L‑岩藻糖，所述R³为氢或硫酸酯基，所述R⁴为羟基或乙酰胺基。本发明提供的唾液酸寡糖‑磁纳米酶，不仅能够富集分离流感病毒，还具有极强的过氧化物酶活性，能够直接催化色原底物显色，无需使用酶标抗体，从而实现流感病毒的快速检测。

技术领域

本发明涉及流感病毒检测领域，具体涉及一种唾液酸寡糖-磁纳米酶及其制备方法和应用。

背景技术

流行性感冒(流感)是由流感病毒引起的人、兽、禽共患传染病。研究证实，流感病毒表面糖蛋白血凝素(hemagglutinin，HA)特异识别宿主细胞表面的唾液酸糖链受体，这是流感病毒感染宿主、复制以及传播感染的生物学基础。流感病毒的变体，如H7N9，严重威胁人类和动物的健康。因此，开发简单、快速、准确的流感病毒检测方法是十分有必要的。

随着现代检测技术的不断发展，检测流感病毒的方法越来越多样化。现在常用的方法是夹心酶联免疫吸附实验(Sandwich Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)，利用辣根过氧化物酶标记二抗最后进行显色。在该方法中，先由捕获抗体将流感病毒固定，接着用酶标记的二抗进行显色，进而实现定性和定量的检测。但是抗体和酶属于生物制品，对其的获取以及优化相对复杂，而且这些反应的灵敏度和结果稳定性大都依赖于反应温度和PH并且价格昂贵。其次，这种方法操作繁琐，对操作人员的技术和熟练程度要求较高，费时费力。此外，对于检测流感病毒含量低、成分复杂的实际样品，具有一定的挑战性。因此，迫切需要开发一种能够实现对样品进行富集分离并且能够替代抗体和酶的检测手段，从而实现高效检测流感病毒。

近年来，随着纳米技术的蓬勃发展，利用纳米材料进行检测和诊断已经成为现实。现在已经发现的纳米材料有金纳米、磁纳米、铂纳米和量子点在内的各种新材料，各自具有独特的理化性质。金属纳米材料是迄今为止被研究最多的纳米材料之一。纳米酶探针分子具有磁性，可对样品分离富集，并且具有催化活性，可使底物显色，提高检测灵敏度。但是，目前应用最多的免疫磁珠或者免疫磁纳米粒子大都依赖于抗体。

流感病毒表面的HA可以特异性识别和结合唾液酸寡糖受体，因此流感病毒对唾液酸的识别和结合有偏好型，禽流感病毒倾向于结合Siaα2,3Gal受体，而人流感病毒则主要结合Siaα2,6Gal受体。禽类的肠道主要含Siaα2,3Gal受体，人类的上呼吸道上皮细胞主要有Siaα2,6Gal受体。合成唾液酸糖链，将其连接到磁纳米上，这样就可以对流感病毒含量极低的复杂的生物样品中对流感病毒进行富集分离及检测。申请号为201611102165.5的中国专利申请公开了一种唾液酸寡糖－磁纳米粒子，能够富集流感病毒，并通过抗相应亚型流感病毒HA的一抗和酶标二抗进行检测，实现了对人流感和禽流感病毒的选择性富集分离。然而，使用该磁纳米粒子进行流感病毒的检测需要使用一抗和酶标二抗，操作繁琐，且价格昂贵。

因此，需要开发一种新型唾液酸寡糖-磁纳米酶，实现不同亚型流感病毒的快捷、经济、灵敏、准确的检测。

发明内容

为简化流感病毒的检测方法，降低检测成本，本发明提供一种唾液酸寡糖-磁纳米酶，不仅能够富集分离流感病毒，还具有极强的过氧化物酶活性，能够直接催化色原底物显色，无需使用酶标抗体，从而实现流感病毒的快速检测。

本发明请求保护的技术方案如下：

式Ⅰ或式Ⅱ所示的唾液酸寡糖-磁纳米酶：