[发明专利]一种软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质的制备方法，其特征在于，以罗非鱼皮为原料，经脱细胞处理后制得可用于软组织再生修复的仿生基质材料。

2.根据权利要求1所述的软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质的制备方法，其特征在于，按如下步骤处理：

(1)罗非鱼皮预处理：将新鲜罗非鱼皮清洗、去除冗余组织及杂质；

(2)预处理：4℃下，对步骤(1)预处理后的罗非鱼皮进行粗整理清除部分冗余；

(3)微结构保护：4℃下，以料液比1:5-1:20(w/w)的磷酸盐缓冲液(0.05-0.2M，pH7.0-7.4)搅拌2-4h后排除废液；以上步骤重复1-3次；

(4)清洗：4℃下，以料液比1:5-1:20(w/w)的2％-5％NaCl溶液搅拌2h后排除废液；

(5)初次脱细胞处理：将上述罗非鱼皮平铺于经干烤灭菌的托盘中，迅速置于-40℃冷冻2-4h，于洁净条件下解冻，如此反复冻融处理2-4次；

(6)微结构再保护：4℃下，以料液比1:5-1:20(w/w)的磷酸盐缓冲液(0.05-0.2M，pH7.0-7.4)搅拌2-4h后排除废液；以上步骤重复1-2次；

(7)二次脱细胞处理：4℃下，以料液比1:5-1:20(w/w)的脱细胞溶液搅拌处理8-18h，对罗非鱼皮进行再整理清除上述处理过程形成的部分冗余组织；4℃下，以料液比1:5-1:20(w/w)的生理缓冲液清洗2-4次，每次0.5-4h；

(8)清洗：4℃下，以料液比1:5-1:20(w/w)的2％-5％NaCl溶液搅拌2h后排除废液；

(9)保护液预处理及加工成型：4℃下，将制备的脱细胞罗非鱼皮仿生基质浸泡于料液比1:5-1:20(w/w)的保护液中，缓慢搅拌1-4h；并加工成型，制得脱细胞罗非鱼皮仿生基质，包装；

(10)最终灭菌得成品：将所得包装完好的干态或湿态脱细胞罗非鱼皮仿生基质最终灭菌，可得成品。

3.根据权利要求2所述的软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述罗非鱼皮为新鲜剥离的材料，其来源有可追溯性且符合检疫要求。

4.根据权利要求2所述的软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述罗非鱼皮预处理的具体工艺为：将新鲜罗非鱼皮刮除残余鳞片及冗余肌肉等组织，采用4℃去离子水多次冲洗除尽残余血液，并根据不同解剖部位裁切成合适尺寸，迅速置于-40℃冷冻，使用前取出于室温下流水解冻。

5.根据权利要求2所述的软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述粗整理清除部分冗余的具体工艺为：4℃下，以料液比1:5-1:20(w/w)的2％-5％NaCl溶液搅拌1-4h后排除废液，重复2-4次；以料液比1:5-1:20(w/w)的柠檬酸(0.005-0.05mol/L)处理0.5-2h。

6.根据权利要求2所述的软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质的制备方法，步骤(3)和步骤(6)中所述磷酸盐缓冲液为PBS缓冲液、Hank’s缓冲液、D-Hank’s缓冲液中的一种。

7.根据权利要求2所述的软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质的制备方法，其特征在于，步骤(7)中所述脱细胞溶液为0.5-4％脱氧胆酸钠、0.1-1％十二烷基硫酸钠、0.1-1％Triton X-100、烷基糖苷、0.05-5μg/ml胰蛋白酶或胃蛋白酶或DipaseⅡ的一种或几种。

8.根据权利要求2所述的软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质的制备方法，其特征在于，步骤(9)中所述保护液为生理缓冲液、细胞培养液、组织保存液、透明质酸溶液、壳聚糖溶液、右旋糖酐溶液、甘油等的一种或几种。

9.一种如权利要求1-8任一项所述方法制备的软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质。

10.一种如权利要求9所述的软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质的应用，其特征在于，所述软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质在烧烫伤创面修复、溃疡创面、疝气修补、硬脑膜修补、尿道/膀胱/盆底重建、牙周组织修复、粘膜组织修复中的应用。