[发明专利]一种从发酵液中分离武夷菌素的方法

说明书

本发明涉及一种从发酵液中分离武夷菌素的方法，包括以下步骤：1)将含有武夷菌素的发酵液去除其中的培养基固体残渣及菌体，得到上清液；2)利用草酸沉淀步骤1)得到的上清液中的杂质，之后离心，去除沉淀和杂质，得到溶液；3)将步骤2)得到的溶液采用大孔吸附树脂处理，收集流出液；4)将步骤3)收集的流出液通过凝胶层析处理，分别收集不同时间段流出的流出液；5)利用高效液相色谱法检测步骤4)收集的流出液，选择具有武夷菌素且无杂峰的流出液冻干，获得武夷菌素的粗品；6)用制备液相系统或半制备液相系统对5)冻干后的粗品进行制备、精制，获得高纯度武夷菌素。本发明具有提取率高、武夷菌素提取纯度高等优点。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种从发酵液中高效分离纯化武夷菌素的方法。

背景技术

武夷菌素是一种具有我国完全自主知识产权的低毒、高效、广谱、环保的新型农用抗生素，由不吸水链霉菌武夷变种发酵生产，是一种结构全新的水溶性的核苷类抗生素，其分子结构式为：

武夷菌素由中国农业科学院植物保护研究所自主研发，对蔬菜和果树等多种作物的真菌性病害具有明显的防治效果，在农业生产中得到了广泛的应用，创造了可观的经济、社会和生态效益。但是长期以来，由于武夷菌素是水溶性物质，极性很大，导致其分离提取困难，过去采用活性炭吸附、离子交换、氧化铝和凝胶LH-20层析等步骤，提取率很低，并且纯度也不高，只有70％左右，直接影响了其防病机理、化学结构修饰和改造、毒理、环境行为、防病抗病效用的提高等方面的研究，进而影响了武夷菌素的农药登记工作及其产业化。因此探索高效分离提取技术及建立新型提取工艺对于提高武夷菌素的工厂化生产水平，增强其市场竞争力，以及增强我国具有自主知识产权的生物农药创新能力具有现实的紧迫意义。

发明内容

鉴于现有技术所存在的问题，本发明的目的在于针对目前武夷菌素提取效率低，纯度低的问题，提出一种高效提取高纯度武夷菌素的方法，整个过程不使用有毒有害的化学有机试剂，具有提取率高、清洁、环保、简便、高效的特点，提取率较以有工艺大幅提高，纯度可以达到95％以上。同时由于武夷菌素是易溶于水的物质，极性大，本发明对于从发酵液里分离提取极性大的水溶性物质也具有重要的借鉴意义。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

本发明提供一种从发酵液中分离武夷菌素的方法，包括以下步骤：

1)将含有武夷菌素的发酵液去除培养基固体残渣及菌体，得到上清液；

2)利用草酸沉淀步骤1)得到的上清液中的杂质，之后通过离心或过滤去除沉淀和杂质，得到溶液；

3)将步骤2)得到的溶液采用大孔吸附树脂处理，收集流出液；

4)将步骤3)收集的流出液通过凝胶层析处理，分别收集不同时间段流出的流出液；

5)利用高效液相色谱法检测步骤4)收集的流出液，选择具有武夷菌素且无杂峰的流出液冻干，获得武夷菌素的粗品。

本发明中，去除沉淀和杂质的方法可以为离心也可以为过滤，优选采用离心的方式去除沉淀和杂质，速度快且所需时间短。

本发明的有益效果为：

现有分离方法采用活性炭吸附除杂质，但是活性炭选择性较差，吸附能力太强，洗脱下来很困难，且易污染环境，该步骤造成武夷菌素大量损失。本发明采用大孔吸附树脂可以很好的克服上述问题，还具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点，既能有效吸附色素等杂质，同时又不会吸附武夷菌素，将武夷菌素的损失降低到最小，从而提高武夷菌素的提取率。