[发明专利]一种从发酵液中分离武夷菌素的方法

权利要求书

1.一种从发酵液中分离武夷菌素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将含有武夷菌素的发酵液去除其中的培养基固体残渣及菌体，得到上清液；

2)利用草酸沉淀步骤1)得到的上清液中的杂质，之后离心或过滤，去除沉淀和杂质，得到溶液；

3)将步骤2)得到的溶液采用大孔吸附树脂处理，收集流出液；

4)将步骤3)收集的流出液通过凝胶层析处理，分别收集不同时间段流出的流出液；通过凝胶层析处理的方法包括以下步骤：先采用凝胶Toyopearl HW-40C进行凝胶层析处理，再采用凝胶Toyopearl HW-40F进行凝胶层析处理；

5)利用高效液相色谱法检测步骤4)收集的流出液，选择具有武夷菌素且无杂峰的流出液冻干，获得武夷菌素的粗品；

上述武夷菌素的分子结构式为：

2.根据权利要求1所述一种从发酵液中分离武夷菌素的方法，其特征在于，在步骤5)获得武夷菌素的粗品之后，还包括以下步骤：利用制备液相法或半制备液相法对武夷菌素的粗品进行纯化。

3.根据权利要求2所述一种从发酵液中分离武夷菌素的方法，其特征在于，对武夷菌素的粗品进行纯化的具体操作方法为：将步骤5)获得的武夷菌素的粗品用水复溶，采用半制备液相系统或制备液相系统进行制备，以除去组分中的杂质；液相条件为：CAPCELL PAKC18 AQ色谱柱，色谱柱直径为10mm或20mm，色谱柱长度为250mm，色谱柱内填料的粒径为5μm，流速为2-4ml/min，检测波长254nm，进样量500μL至2mL，柱温25℃，流动相为质量分数为0.1％三氟乙酸，在保留时间为15-16min处出现武夷菌素的峰，收集该峰，并冻干，即获得纯度大于95％的武夷菌素。

4.根据权利要求1-3任一项所述一种从发酵液中分离武夷菌素的方法，其特征在于，采用凝胶Toyopearl HW-40C进行凝胶层析处理的方法包括以下步骤：对凝胶Toyopearl HW-40C进行预处理，将步骤3)收集的流出液加入到装有凝胶Toyopearl HW-40C的凝胶层析柱中，液面高出凝胶Toyopearl HW-40C的上表面8-15cm，用水洗凝胶Toyopearl HW-40C，以5-12滴/分钟的速度通过凝胶Toyopearl HW-40C， 待色素到凝胶层析柱底部，开始收集流出液，按照20-100ml/管收集流出液。

5.根据权利要求4所述一种从发酵液中分离武夷菌素的方法，其特征在于，采用凝胶Toyopearl HW-40F进行凝胶层析处理的方法包括以下步骤：对凝胶Toyopearl HW-40F进行预处理，将收集的流出液加入到装有凝胶Toyopearl HW-40F的凝胶层析柱，液面高出凝胶Toyopearl HW-40F的上表面8-15cm；用水洗凝胶Toyopearl HW-40F，以5-12滴/分钟的速度通过凝胶Toyopearl HW-40F，待色素到凝胶层析柱底部，开始收集流出液，按照20-100ml/管收集流出液。

6.根据权利要求1-3任一项所述一种从发酵液中分离武夷菌素的方法，其特征在于，步骤1)中，含有武夷菌素的发酵液的制备方法包括以下步骤：将不吸水链霉菌武夷变种CK15发酵60-72小时，收集发酵液。

7.根据权利要求1-3任一项所述一种从发酵液中分离武夷菌素的方法，其特征在于，步骤2)中，利用草酸沉淀上清液中的杂质的方法包括以下步骤：加入草酸到上清液中，调pH至2.0-2.5，静置过夜。