[发明专利]一种检测桃拉综合症病毒的LAMP引物组、试剂盒及方法

说明书

本发明提供的一种桃拉综合征病毒的实时荧光LAMP引物组、检测试剂盒及其检测方法，可以通过实时荧光和LAMP方法的结合，具有操作简便、特异性强、灵敏度高、稳定性强、鉴别简单的特点。依托于LAMP技术，本发明的反应时间短，为快速检测提供了技术支持，因此本发明满足检测要求，在病原体检测中有极高的应用价值。

技术领域

本发明属于水生动物病原体检测领域，关于一种桃拉综合症病毒(Taurasyndrome virus,TSV)的实时荧光LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法。

背景技术

桃拉综合症病毒病是南美白对虾特有的病毒性疾病，病原为RNA病毒，二十面体，无囊膜，有包涵体。病原来源于从国外引进的南美白对虾亲虾，进而传播到我国的大陆及台湾地区，多发于体长6至9cm的蜕皮期白对虾，发病时间为投苗放养后的30至60天，好发于气温剧变后的1至2天内，尤其是当水温高于28℃时。发病后对虾从尾扇开始发红，发红部位逐渐前推，病虾不变软，病情后期身体出现黑斑。该病来势较快，感染率和死亡率较高，对白对虾养殖业产生巨大影响，因此制备一种能够检测桃拉综合征病毒的实时荧光LAMP检测试剂盒为目前所需。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种桃拉综合症病毒的实时荧光LAMP引物。

本发明的另一目的在于提供一种桃拉综合症病毒的实时荧光LAMP检测试剂盒。

本发明的再一目的在于提供一种桃拉综合症病毒的实时荧光LAMP检测方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种桃拉综合症病毒的实时荧光LAMP检测的引物组，引物组的核苷酸序列如下所示：

桃拉综合症病毒外引物：

TSV-F3：5'-ATGTGTTGTTGTGTGAGGAA-3'，

TSV-B3：5'-CTCATCAAAGGTCACAGGG-3'；

桃拉综合症病毒内引物：

TSV-FIP：5'-AGACGCTACATCTCGAGCTGTAACGTGTCGGATTGTTAGTG-3'，

TSV-BIP：5'-CCAATGTGCACATGCACTCTCAATTCCAGAGCTTCACAAGG-3'；

桃拉综合症病毒环引物：

TSV-LF：5'-GCTGTACCAACAGCAGTTAGA-3'，

TSV-LB：5'-CATTCCCTCCCGTATGAGAATT-3'。

一种桃拉综合症病毒的实时荧光LAMP检测试剂盒，该试剂盒中含有上述所述的引物组。

一种桃拉综合症病毒的实时荧光LAMP检测方法，包含以下步骤：

1)提取样本RNA；

2)以提取的RNA作为模板，使用上述所述的引物TSV-F3、TSV-B3、TSV-FIP、TSV-BIP、TSV-LF和TSV-LB进行实时荧光LAMP扩增反应获得产物；

3)根据扩增曲线进行分析，确定样品中是否含有桃拉综合症病毒；

上述方法不用于疾病的诊断和治疗。

进一步的，实时荧光LAMP扩增反应体系为：

进一步的，所述的DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶。

进一步的，所述的逆转录酶为AMV逆转录酶。

进一步的，所述的封闭液为甘油。