[发明专利]人类MTHFR和MTRR基因检测试剂盒及其用途

说明书

本发明公开了一种人类MTHFR和MTRR基因检测试剂盒及其用途，所述试剂盒包括以下各组分：MTHFR 677/MTHFR 1298/MTRR 66三重检测液以及可选的以下组分：核酸扩增反应液、酶混合液、阳性对照和空白对照。本发明公开的人类MTHFR和MTRR基因检测试剂盒能够在同一反应管中同时检测出MTHFR基因677位点和1298位点以及MTRR基因66位点基因型。此外，该试剂盒还具有特异性强、灵敏度高，操作简便、可重复性强、检测结果快速客观等优点，本发明的提出为人类MTHFR和MTRR基因的体外检测提供了一种有效的技术手段。

技术领域

本发明涉及一种人类基因组DNA基因型检测的体外诊断试剂盒，尤其涉及MTHFR和MTRR基因检测试剂盒及其用途，属于生物技术领域。

背景技术

叶酸是饮食中重要的甲基供体，参与DNA甲基化和DNA合成通路。叶酸缺少会引起人DNA中的尿嘧啶错误插入，及染色体断裂，从而导致基因组的不稳定性和突变概率的增加。叶酸代谢通路异常，会导致高同型半胱氨酸败血症。高同型半胱氨酸败血症是多种疾病的危险因子，会导致各种增加的风险，如血管和神经疾病，妊娠并发症，男性不育，新生儿缺陷，糖尿病，肾脏疾病，骨质疏松症，神经精神疾病和癌症。

MTHFR(5,10-methylenetetrahydrofolate reductase)基因，编码5,10亚甲基四氢叶酸还原酶，位于第一号染色体1p36.3位置。MTHFR全长19.3kb，共有外显子12个，mRNA全长7,105bp，编码657个氨基酸残基组成的蛋白；能够催化5,10-MTHFR还原为5-甲基四氢叶酸，作为一个甲基供体，参与同型半胱氨酸到甲硫氨酸的甲基化。MTHFR基因突变主要发生在677和1298位点，677位点(CT)突变会使基因编码的5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶的活性发生不同程度的变化，677TT使酶活性降低几乎为70％左右，677CT则是降低了35％的活性。MTHFR基因的1298位点，其多态性导致异亮氨酸被甲硫氨酸替换，从而导致同型半胱氨酸再甲基化的速率。而据相关文献研究，1298位点的突变可以和677位点的突变发生协同效应，导致5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶的活性进一步的降低。

MTRR(5-methyltetrahydrofolate-homocysteinemethyltransferasereductase)基因，编码甲硫氨酸合成酶还原酶，位于染色体5p15.3-p15.2位置，MTRR基因全长32021kb，mRNA全长3274bp，共有15个外显子，编码具有726个氨基酸的蛋白质。MTRR编码的甲硫氨酸合成酶还原酶能够通过还原型甲基化作用重新生成具有功能活性的甲硫氨酸合酶。MTRR基因的66位点(AG)突变会对叶酸DNA甲基化代谢途径产生影响。

现有的针对MTHFR和MTRR基因检测的体外诊断试剂盒大多采用单重荧光PCR反应，或者直接采用直接测序法，焦磷酸测序法等。若要完成MTHFR和MTRR基因3个位点基因型的检测需要分别进行一个荧光PCR反应，在面对大规模样本检测时，无疑会耗费大量的人力物力，也会延长诊断时间；测序法则操作繁琐耗时且灵敏度低。因此，目前急需建立一种特异性好，灵敏性高的能够实现单一反应管中同时检测3个位点基因型的方法，以期能够更好、更快的用于MTHFR和MTRR基因3个位点基因型的检测。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种能够在单一反应管中同时检测MTHFR和MTRR基因3个位点基因型检测的试剂盒，该试剂盒具有特异性强、灵敏度高等优点。

为了达到上述目的，本发明采用了以下的技术手段：

本发明是一种人类MTHFR和MTRR基因检测试剂盒，其特征在于，包括以下各组分：MTHFR 677/MTHFR 1298/MTRR 66三重检测液以及可选的以下组分：核酸扩增反应液、酶混合液、阳性对照和空白对照；

其中，所述的MTHFR 677/MTHFR 1298/MTRR 66三重检测液包括以下3组组分：