[发明专利]一种寨卡病毒一步法荧光rt-PCR检测方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种寨卡病毒一步法荧光rt‑PCR检测方法及试剂盒。本发明设计了用于检测该遗传标志物的特异性引物对和探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～3所示。本发明还提供了所述的特异性引物对和/或探针的应用、用于检测寨卡病毒的试剂盒及寨卡病毒一步法荧光rt‑PCR检测方法。本发明的荧光定量PCR反应可在同一反应管内连续进行，操作简单，并能有效防止污染。所述的检测方法快速、准确、灵敏，并可消除寨卡病毒和其他黄病毒在血清学检测上的交叉反应的影响，具有良好的特异性；亦具有广谱性及广泛的临床适应性，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物检测领域，特别涉及一种寨卡病毒一步法荧光rt-PCR检测方法及试剂盒。

背景技术

寨卡病毒(ZIKV)是蚊子传播的黄病毒，其首先于1947年在乌干达从发热的恒河猴中分离，并且与其他全球相关的节肢动物传播的人类病原体相关，包括登革热(DENV)，黄热病(YFV)，西尼罗河(WNV)，日本脑炎(JEV)和蜱传脑炎病毒。在过去十年中，ZIKV感染曾在密克罗尼西亚，法属波利尼西亚、南美洲和中美洲引起大流行病。在大多数情况下，ZIKV感染导致与皮疹和结膜炎相关的自限性发热性疾病，但也可能导致严重的神经系统疾病包括格林-巴利综合征和脑膜脑炎。尤其孕妇感染值得关注，因为它与严重的胎儿畸形异常有关，包括小头症，自发流产和胎盘功能不全的子宫内生长限制。

该病毒是全长不分节段单股正链ssRNA(+)病毒，包含两个侧翼非编码区5’NCR和3’NCR。基因组5’端具有典型的甲基化帽子结构用于细胞翻译，3’末端非多聚腺苷酸化而形成环状结构。病毒颗粒RNA具有传染性，同时兼具基因组RNA和病毒信使RNA功能，通过宿主和病毒蛋白酶共同翻译和翻译后处理为多聚体蛋白。目前针对寨卡病毒的实验室诊断方法有病原学方法、血清学方法和针对病毒核酸的检测技术。

传统的病原学方法主要通过细胞培养进行病毒的分离，耗时耗力，而且寨卡病毒的毒血症持续时间短，较难采集到合适的样品。血清学检测方法，包括ELISA，免疫荧光、中和试验等，也被广泛的应用于寨卡病毒的实验室检测。但病毒特异性IgM和中和抗体出现较晚，约发病后1周末期才可检出，同时黄病毒间交叉反应常见难以鉴别。

发明内容

本发明的第一目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种用于检测寨卡病毒的遗传标记物。

本发明的第二目的在于提供用于检测寨卡病毒的特异性引物对和探针。

本发明的第三目的在于提供所述的特异性引物对和/或探针的应用。

本发明的第四目的在于提供用于检测寨卡病毒的试剂盒。

本发明的第五目的在于提供基于所述的特异性引物对和/或探针的寨卡病毒一步法荧光rt-PCR检测方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种用于检测寨卡病毒的遗传标记物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。此外，本领域技术人员应当理解，该序列的特异性片段也可以作为检测寨卡病毒的遗传标记物。

所述的用于检测寨卡病毒的遗传标记物在制备检测寨卡病毒试剂盒中的应用。

本发明根据该保守序列，通过反复对比、筛选，设计了用于检测该遗传标志物的特异性引物对和探针。所述的用于检测寨卡病毒的特异性引物对为：

上游引物序列为：5’-GGTTCTCATCAATGGTTTTGCT-3’；(如SEQ ID NO.1所示)

下游引物序列为：5’-TGGAACAACCATCGCTCGTA-3’。(如SEQ ID NO.2所示)