[发明专利]β1;4半乳糖基转移酶I的检测系统

权利要求书

1.一种β1,4半乳糖基转移酶I的检测系统，其特征在于，包括整体水平检测系统、细胞水平检测系统、运用实验性大鼠CIA模型的检测系统，其中，

（1）整体水平检测系统，分析GalT-I在RA炎症过程中表达的时空变化，及这些变化与炎症相关粘附分子表达及其糖链修饰之间的关系；

（2）细胞水平检测系统，分析GalT-I的表达及相关糖链的合成在RA成纤维样滑膜细胞和软骨细胞在炎症过程中的作用及机制，以及这些作用对RA炎症过程的影响；

（3）运用实验性大鼠CIA模型的检测系统，分析GalT-I的表达与RA炎症过程之间的关系，探讨GalT-I在RA病理过程中的临床意义；

（4）探讨滑膜组织中GalT-I的表达水平在RA患者诊断、预后评价中的意义；

（5）结合整体、离体实验、CIA模型及临床研究，综合分析GalT-I在RA疾病过程中的作用及意义。

2.根据权利要求1所述的β1,4半乳糖基转移酶I的检测系统，其特征在于，步骤（1）包括如下具体步骤：

（1-1）收集人RA关节软骨和滑膜标本，通过Northern Blot或Real-Time PCR、原位杂交、Western Blot和免疫组化方法，分析GalT-I在RA炎症过程中表达的时空变化，用RCA-I凝集素分析RA炎症过程中上述组织中Galβ1-4GlcNAc的时空变化；

（1-2）应用Western Blot和免疫组化，分析RA炎症过程中需要Galβ1-4GlcNAc修饰调节的选择素及其它粘附分子在上述组织中的时空变化；

（1-3）利用蛋白质免疫共沉淀方法和免疫荧光双标分析步骤（1-2）中的选择素及其它粘附分子在RA炎症过程中Galβ1-4GlcNAc糖链修饰情况，以及与GalT-I和Galβ1-4GlcNAc的时空表达关系。

3.根据权利要求1所述的β1,4半乳糖基转移酶I的检测系统，其特征在于，步骤（2）包括如下具体步骤：

（2-1）分析成纤维样滑膜细胞和软骨细胞，在LPS、TNF-α、IFN-γ炎性因子刺激后，迁移、粘附过程中，GalT-I、Galβ1-4GlcNAc以及相关选择素和粘附分子上有关糖链修饰情况；

（2-2）利用GalT-I的表达质粒和RNAi干扰质粒，应用GalT-I酶、半乳糖苷酶活性特异性抑制剂和唾液酸酶抑制剂，并通过外源性给予GalT-I的底物UDP-Gal，以及GalT-I酶活性中心点突变失活的表达质粒，干预上述过程中的GalT-I表达以及Galβ1-4GlcNAc及相关糖链合成，分析相关选择素及其它粘附分子上有关糖链修饰的改变情况，以及改变成纤维样滑膜细胞受炎症刺激后迁移、粘附、吞噬以及炎症因子合成、释放等细胞行为的影响。

4.根据权利要求1所述的β1,4半乳糖基转移酶I的检测系统，其特征在于，步骤（3）包括如下具体步骤：

（3-1）将Ⅱ型胶原用0.1mol/L的冰醋酸溶解后，配成2g/L的溶液，加等体积不完全佐剂，使终质量浓度为1g/L，大鼠用乙醚麻醉后，鼠背部剃毛，自鼠尾部开始，用1mL乳剂分4～6个部位注射大鼠背部皮内，1周后加强免疫1次，注射0.5mL，建立胶原诱导的大鼠实验性关节炎动物模型；

（3-2）分析GalT-I、Galβ1-4GlcNAc以及有关选择素及其它粘附分子上相关糖链修饰在RA发病过程中的表达时空变化及相关性分析；

（3-3）应用RNAi技术或反义寡核苷酸技术关节囊注射，观察干扰GalT-I的表达后，对RA病程及预后的影响。