[发明专利]一种用于检测白术叶斑病致病菌的引物及其方法和应用

权利要求书

1.一种白术叶斑病致病菌Phoma herbarum非疾病诊断目的的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取待测样品基因组DNA；

2）利用如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的通用引物ITS1/ITS4进行第一轮PCR扩增；

3）将第一轮扩增产物稀释10倍，作为模板，利用如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的特异引物BZYBF/BZYBR进行第二轮PCR扩增；

4）凝胶电泳检测，于凝胶成像系统下拍照检测，存在313 bp的DNA特异性条带，则确定所检测样品中存在白术叶斑病致病菌。

2.根据权利要求1所述的一种白术叶斑病致病菌Phoma herbarum非疾病诊断目的的快速检测方法，其特征在于，所述的样品基因组利用CTAB法提取。

3.根据权利要求1所述的一种白术叶斑病致病菌Phoma herbarum非疾病诊断目的的快速检测方法，其特征在于，所述的第一轮PCR扩增的反应体系为25μL：2×Taq Master Mix12.5μL，10μM的上下游引物ITS1/ITS4各1μL，DNA 1μL，双蒸水9.5μL；反应程序为：预变性94℃ 5分钟， 94℃ 30秒，54℃ 1分钟，72℃ 1分钟，30个循环，最后在72℃延伸3分钟，16℃保存。

4.根据权利要求1所述的一种白术叶斑病致病菌Phoma herbarum非疾病诊断目的的快速检测方法，其特征在于，所述的第二轮PCR扩增的反应体系为25μL：2×Taq Master Mix12.5μL，10μM的上下游引物BZYBF/BZYBR各1μL，DNA模板1μL，双蒸水9.5μL；反应程序为：预变性94℃ 3分钟，接着94℃ 30秒，52℃ 30秒，72℃ 30分钟，30个循环，最后在72℃延伸3分钟，16℃保存。