[发明专利]一种鹿鞭蛋白低聚肽的工业化生产工艺

权利要求书

1.一种鹿鞭蛋白低聚肽的工业化生产工艺，其特征在于步骤如下：

（1）原料

原料选用切割下的包括阴茎与睾丸完整的干鹿鞭；

（2）浸泡软化

注水浸泡48h-72h；

（3）绞碎

绞碎成粒度为0.1-0.2cm cm的碎块；

（4）脱脂

将绞碎的鹿鞭用1.0-2.0%醋酸溶液的脱脂液浸泡脱脂1-2d,最后用30-50℃温水漂洗2次,获得脱脂浸泡的鹿鞭；

（5）磨浆

磨成颗粒在20～50μm磨浆液；

（6）盐析

将制得的精磨浆液调节pH值4.0～4.5，加入NaCl粉末进行盐析，静置12～24h，获得胶原混合液；

（7）压滤

将混合液均匀铺设到板框滤布上，输送混合液开始压滤1～6h，弃去滤饼，得到透明的滤液；

（8）酶解

将压滤后的浆液调节pH值为9.0～9.5，在50℃～60℃条件下，加入1-3％胰蛋白酶，使鹿鞭蛋白酶解反应8h～10h，在酶解过程中以30转/min不断搅拌后得到含有低聚肽混合液；

（9）超滤低聚肽

将酶解液经反渗透超滤机组进行分级超滤，先经过分子量75KDa的超滤器，再经过分子量3KDa的超滤器过滤；合适分子量片段的肽透过膜进入收集器，大片段的肽继续和酶作用再酶解，再超滤获得低聚肽过滤液；超滤后将其温度升温至80～95℃进行高温灭酶；

（10）纳滤截留浓缩、脱盐、脱杂质

将蛋白低聚肽滤液泵入反渗透纳滤机组的分子量为500Da的纳滤器中进行浓缩；再将浓缩液加同样的体积水洗脱3-5次，获得浓缩至含水量仅有3-5%的最小体积纳滤截留液；将收集含有原料中的其他物质及无机盐等纳滤过滤液,进行净化处理,收集的纳滤截留液为低聚肽浓缩液；

（11）除菌

将浓缩液采用分子量60-80KDa中空纤维超滤器过滤后，再进入0.22μm微孔滤芯进行过滤，通过截留的方式进行除菌；

（12）灌装

在西林瓶中灌装；

（13）冷冻干燥

（a）预冻固化：将罐装浓缩液西林瓶，摆放在真空冷冻干燥机冻干仓内的隔板上，预冻固化温度-30～-45℃，并保持5～8h，使浓缩液中水分充分冻结，确保无液体存在；

（b）升华干燥：冻干机启动真空系统，将仓内压力抽至30～50pa，采取缓慢升温,以每小时1℃的升温速率,缓慢升温到-20～-25℃,保温6～8h,再以每小时2℃的升温速率,缓慢升温到-10℃～-12℃,保温3～6h，进行升华干燥；

（c）解析干燥：升华干燥后，再以每小时3℃的升温速率,缓慢升温到40～50℃,压力为10～20Pa；保温6～8h,完成解析干燥冻干，加压塑料盖后取出；

（14）压瓶盖塞、贴标签

冷冻干燥后在无菌条件下机械压瓶盖塞，进入贴标机使其贴好标签；

制成蛋白纯度高达99.5%、相对分子质量小于1000Da的低聚肽成份含量平均大于92%的鹿鞭低聚肽成品粉。