[发明专利]一种大白兰花生长点萃取物安全性检测方法

说明书

本发明公开了一种大白兰花生长点萃取物安全性检测方法，涉及技术领域。本发明包括SS01、检测细胞存活度：SS02、评估兰花生长点萃取物之保护因紫外线及氧化伤害而造成的DNA损伤：SS03、评估兰花生长点萃取物修护因紫外线造成皮肤细胞损伤。本发明通过对兰花萃取物进行检测试验后，使用兰花萃取液兰花生长点萃取物作为化妆品的添加剂开发新的化妆品系列，提高了兰花产业的附加价值。

技术领域

本发明属于萃取物安全性检测技术领域，特别是涉及一种大白兰花生长点萃取物安全性检测方法。

背景技术

化妆品是指以涂抹、喷洒或者其他类似方法，散布于人体表面的任何部位，如皮肤、毛发、指趾甲、唇齿等，以达到清洁、保养、美容、修饰和改变外观，或者修正人体气味，保持良好状态为目的的化学工业品或精细化工产品。化妆品种主要是由一些添加剂组成；而现有的一些添加剂对皮肤都有一定的损害作用；2010年后，零负担产品开始诞生，一批零负担产品，将主导减少没必要的化学成分，增加纯净护肤成分为主题，给用过频繁化妆品的女性朋友带了全新的变革，“零负担”产品的主要特点在于，产品激烈减少了很多无用成分，护肤成分，例如玻尿酸、胶原蛋白等均为活性使用，直接肌肤吸收，产品性能极其温和，哪怕再脆弱的肌肤只要使用妥当，一般也没有问题，因此，这就可以最大限度的化妆不破坏皮肤。

目前市场上未有开发兰花生长点萃取物之化妆品；因此针对以兰花萃取液作为化妆品的添加剂制造兰花系列的化妆品之前需对兰花对皮肤细胞的损伤进行测定，本发明一种大白兰花生长点萃取物安全性检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大白兰花生长点萃取物安全性检测方法，通过细胞存活度试验；细胞周期试验；保护因紫外线及氧化伤害而造成的DNA损伤试验；修护因紫外线及氧化伤害而造成的皮肤细胞损伤试验对兰花萃取物的安全性进行评价，解决了现有兰花系列化妆品空缺的问题。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为一种大白兰花生长点萃取物安全性检测方法，包括如下过程：

SS01、检测细胞存活度：

具体包括评估兰花生长点萃取液对皮肤细胞是否具细胞毒性，评估兰花生长点萃取液对皮肤细胞型态变化，评估皮肤细胞周期；

SS02、评估兰花生长点萃取物之保护因紫外线及氧化伤害而造成的DNA损伤：

具体包括兰花生长点萃取物保护环状DNA效应评估、兰花生长点萃取物保护片段化DNA效应评估；

SS03、评估兰花生长点萃取物修护因紫外线造成皮肤细胞损伤：

具体包括评估萃取物修护皮肤细胞经紫外线作用后细胞存活度、评估侦测DNA损伤之环丁嘧啶二聚体生成量。

进一步地，所述SS01中检测细胞存活度中评估兰花生长点萃取液对皮肤细胞是否具细胞毒性的过程如下步骤：

S011、皮肤细胞培养：取人类皮肤角质株化细胞培养在96孔培养板中，并96孔培养板放在37℃以及5％CO₂培养箱中培养至少24小时；

S012、萃取液配置：取冷藏备用的兰花生长点萃取物并配置成不同浓度梯度的萃取液；

S013、细胞毒性评估：向S011中的96孔培养板加入S012配置的不同浓度的萃取液，反应后移除培养液，并用无菌PBS清洗一次后重新加入培养液以及10ul的MTT溶液反应，在37℃以及5％CO₂培养箱中培养反应4小时后移除培养液，加入100μL的DMSO溶解甲臢沉淀物，最后于波长570nm下测定吸光值。

进一步地，所述SS01中检测细胞存活度中评估兰花生长点萃取液对皮肤细胞型态变化的过程如下步骤：