[发明专利]一种条件性neuritin knockin小鼠模型的构建方法

说明书

本发明公开了一种条件性的neuritin knockin小鼠模型及其构建的方法。利用基因打靶技术，将外源构建的条件性基因打靶载体，定点整合入胚胎干细胞基因组上，从而构建出neuritin基因打靶小鼠。条件性neuritin knockin小鼠模型在研究与人类疾病相关neuritin基因的功能的应用。本发明的条件性neuritin knockin小鼠模型，可以和任何带有组织特异性启动子的cre鼠杂交，在没有外源给予tamoxifen的情况下neuritin是不表达的，只有在外源性给予tamoxifen的情况下neuritin才会过表达，可实现个体特定的组织和特定的时间选择性的调控neuritin基因的功能，可以更加透彻的在生物体内研究该基因的功能。当然，实施本申请的任一产品必不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。

技术领域

本申请属于生物工程领域，更确切地说是提供条件性neuritin knockin小鼠模型的构建方法。

背景技术

Neuritin，也称作可塑性相关候选基因15(CPG15，candidate plasticity-related gene 15)，是一种与神经可塑性密切相关的神经营养因子。已有研究表明Neuritin可抑制神经细胞凋亡，维持神经元的存活，保护运动神经元；促进神经突起的生长及其分支，调节突触回路的形成，介导突触可塑性，因此在神经系统的发育及损伤修复中发挥了重要作用。

近年研究显示，过表达的Neuritin与神经生长因子(nerve growth factor，NGF)具有协同作用，体外实验表明神经生长因子驱使PC12细胞分化为类神经元细胞，使其长出更长的突起，关于Neuritin的功能国内外的研究均表明Neuritin能够促进PC12细胞、鸡胚背根神经节和神经元的突起生长和存活，并减少骨髓间充质干细胞和神经祖细胞的凋亡。此外，大鼠脊髓损伤后、小鼠短暂性全脑缺血后、大鼠全脑短暂性缺血后，均出现相应区域Neuritin的表达上调，且表达水平的变化趋势与损伤后的功能恢复呈正相关，提示了Neuritin与中枢神经损伤后的功能修复密切相关，若是改变小鼠体内Neuritin的表达量，可能会对组织结构及功能有所影响。

遗憾的是目前在神经系统受损后neuritin发挥的功能有些受限，通过体外细胞培养研究发现的功能也很少在体内得到进一步的证实，也并不知晓Neuritin在耳蜗组织中的表达具有何种生物学功能。

为了进一步在体内研究neuritin基因的功能，并基于重组人神经突起生长因子在神经损伤中的重要修复作用及转基因小鼠的独特优势，构建一个在耳蜗组织特异性过表达neuritin基因小鼠的动物模型，可以更好的从整体动物水平评价Neuritin基因的系统生物学功能，以便研究神经退行性疾病中Neuritin基因发挥作用的机制。

然而截至目前，国内外文献也未见有条件性neuritin knockin小鼠模型的报道。为了针对现有缺乏条件性neuritin knockin小鼠的不足，而提供一种可以和任何带有基因特异性启动子的cre鼠杂交的条件性neuritin knockin小鼠模型及其构建方法，为研究与人类相关疾病提供模型及奠定实验基础。

因此，为了更好的从整体动物水平评价Neuritin基因的系统生物学功能，运用cre/loxp系统，通过位点特异性重组迅速而有效的实现neuritin基因的定点插入，从而建立条件性Neuritin knockin小鼠模型，可将该目的基因敲入小鼠与带有组织特异性启动子的Cre鼠杂交，而带有组织特异性的启动子的Cre鼠的选择是构建组织特异性过表达Neuritin基因小鼠模型的关键，只要选择合适的启动子，通过Cre/Loxp位点依赖的特异性重组，可调控Cre重组酶的表达，使Neuritin基因只会在表达组织特异性启动子的细胞内发生表达，可实现个体特定的组织和特定的时间选择性的调控Neuritin基因的功能，从而更加透彻的在生物体内研究该基因的功能。