[发明专利]一种人Y染色体微缺失检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种人Y染色体微缺失的多重PCR扩增系统和检测试剂盒，所述系统包含以下位点相应序列为SEQ ID No.1至SEQ ID No.40的扩增引物，15个Y染色体微缺失位点(AZFa区4个，AZFb区4个，AZFc区5个，AZFd区2个)、3个样本分子标签位点(X‑STR2个，常染色体In/del位点1个)以及2个性别质控位点(SRY，ZFX/Y)，15个Y染色体微缺失位点采用序列标签位点(STS)特异性引物，3个分子标签位点采用长度多态性引物，2个性别质控位点采用STS特异性引物(EAA/EMQN关于Y染色体微缺失实验室最佳指南推荐检测位点，2013)，本发明所提供的这些引物相互兼容能够在同一PCR扩增体系内进行反应；此外本发明还提供了包含含有扩增引物组合物容器、PCR反应母液容器、PCR辅助液容器的检测试剂盒及其在人Y染色体微缺失非诊断检测中的应用；本发明在DNA提取情况后，通过一个PCR反应对20个遗传标记位点目的片段同时扩增，可显著节省成本、人力和时间，提高工作效率。

技术领域

本发明属于人核酸体外检测技术领域，具体涉及人Y染色体微缺失多重PCR扩增系统和检测试剂盒。

背景技术

据世界卫生组织(WHO)统计，全球约有10-15％的夫妇患有不育症，而男性不育占一半。在男性不育中，半数以上属原因不明者，在这些病人中，约15％表现为无精子症、少精子症。除了输精管梗阻、内分泌异常、性功能障碍、先天性疾病、感染等病因外，相当一部分患者病因一直不明确。自1976年Tiepolo和Zuffardi发现无精子患者存在Yq11远端缺失以来，越来越多的报道支持Yq11远端存在精子发生调控基因，它们的缺失或突变可引起精子发生的异常。Y染色体上存在着精子发生调控基因即无精子症因子(Azoospermia Factor，AZF)，其缺失引起的生精障碍是导致男性不育的重要原因，表现为原发性无精子症(Azoospermia)或少精症(Oligospermia)。现在研究表明，在精子发生障碍引起的男性不育患者中，继克氏综合症之后，Y染色体微缺失被认为是导致男性不育的第二遗传因素。

Y染色体男性-特异区(MSY，male-specific region of the Y chromosome)占整个Y染色体的95％，由拟常染色体区域构成其侧翼序列，基因微缺失的影响，MSY一般分为AZFa、AZFb、AZFc三个独立的亚区；有学者建议将AZFb与AZFc之间且最接近AZFc区列为AZFd区。在不育男性中，虽然由于病人选择标准的差异微缺失发生频率的变动范围较大。但相对来说，其发生频率在不育男性中较为常见，与寡精子症男性相比，无精子症男性拥有更高的微缺失发生率。不同实验室报告的缺失频率变动范围较大，从2％-10％(甚至更高)，这反映了缺失频率受研究人群组成差异的直接影响。AZF各亚区的缺失频率不同，基于Munster生殖医学研究所34个Y染色体微缺失病人的研究结果，AZFc亚区的缺失频率最高，占总缺失的79％；其次是AZFb，占9％；AZFbc占6％；AZFa的缺失频率最低，占3％，另外AZFabc(XX男性：占3％)。

鉴于Y染色体微缺失在男性不育中的重要性以及不同的微缺失对男性不育后续治疗的重要指导价值，在2004年版欧洲男科协会(EAA)和欧洲分子遗传实验质控网(EMQN)关于Y染色体微缺失分子诊断最佳实践指南中，已将Y染色体微缺失检测推荐作为男性少精、无精症患者的常规检测项目以及辅助生殖前的必检项目。