[发明专利]一种快速鉴定川山茶传统名品的方法

说明书

本发明涉及一种快速鉴定川山茶传统名品的方法，本发明提供了3对SSR标记引物P06、A54和A80，并将它们应用于品种鉴定。本发明利用3对SSR引物对10个川山茶品种的DNA进行PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染检测。1、本发明得到的SSR标记图谱特异性条带清晰、非特异带少、多态性高。2、本发明选取的3对SSR引物可以同时将10个川山茶品种全部一一区分，识别品种较多。3、本方法与传统经验鉴别方法相比客观性更强，更加准确。4、本方法与观测数据定性或者定量综合判定方法相比，能够节约时间和成本，对川山茶品种的鉴别提供了更加十分广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及种质鉴定技术，建立了一种针对川山茶传统名品快速准确鉴别的方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

山茶是山茶科Theaceae山茶属Camellia植物，中国十大传统名花，世界名贵花卉之一，是我国西南及长江流域以南较为重要的高观赏性园林绿化树种。山茶栽培历史悠久，很多品种多为营养体变异获得，品种间的形态学差异大多较为细微，有些品种即使是专业人员也难以从表型性状上明确的加以区分，给种质保存、交流、品种选育及生产方面均带来很大困扰。尤其是近几年随着山茶种苗产业的逐渐兴起，种苗市场流通日益频繁，出现了一些因品种错误而造成的苗木纠纷，特别在一些传统名贵品种的交易中尤为突出。建立快速、高效、准确的山茶名品鉴定技术，可成为保护优良品种交流、研究及推广应用的重要技术支撑。

川山茶为茶花五大栽培类群中的重要一支，在巴蜀地区已有2000多年的栽培历史，有很多优秀的古老传统名品，包括白洋片、川玛瑙、胭脂鳞、紫金冠、金顶大红、七心红、川牡丹、醉杨妃、重庆红等等。重庆市南山植物园建有世界唯一的川山茶种质资源基地，收集保育有川山茶古老品种100余种。

苗木品种的鉴定，一是可通过有经验的专业技术人员根据经验从外观形态上加以判定，这往往会造成主观性带来的差错；二是通过观测数据定性或者定量综合判定，但往往需要一个生长季或某个特定生长发育时期(花、果实、种子)的数据观测收集，山茶种子苗从播种到开花往往需要5年左右的时间，因此缺乏时效性和准确性，且表型性状易受栽培管理和环境条件的影响；三是通过DNA分子标记指纹图谱进行鉴定，具有即时、高效、直观、准确的特点。

随着分子生物学的发展，各种DNA分子标记技术不断涌现，检测技术渐趋完善，为实现山茶品种的早期、快速和准确鉴定提供了新途径SSR(Simple sequence repeats，简单序列重复)是近年来广泛使用于各类植研究的分子标记技术，无需预知物种基因组序列，具有实验操作简单、稳定性好、多态性丰富等优点，在进行植物遗传多样性分析、种质鉴定、遗传连锁图的构建、基因连锁标记的寻找与基因定位和比较基因组学研究等方面得到了很好的应用，目前在山茶中的研究，主要侧重于对某类山茶资源材料的亲缘关系方面的探讨。将该技术用于川山茶地方名品的种质鉴定方面的研究未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速鉴定川山茶传统名品的方法，本方法利用SSR分子标记指纹图谱对山茶品种进行鉴定，可快速鉴定10种川山茶传统名品。

本发明的一种快速鉴定川山茶传统名品的方法，所用的SSR标记引物分别为：P06它由核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的下游引物组成，A54它由核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示的下游引物组成，A80，它由核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的下游引物组成。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

一种快速鉴定川山茶传统名品的方法，其特征在于，该方法包含下列步骤：