[发明专利]一种用于检测乙肝病毒的双探针组合物及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测乙肝病毒的双探针组合物，其特征在于，包括正向引物、反向引物、第一探针和第二探针，所述第一探针和第二探针为两条错位双向探针，所述第一探针与反向模板相匹配，所述第二探针与正向模板相匹配。

2.根据权利要求1所述的用于检测乙肝病毒的引物组，其特征在于，所述正向引物具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，所述反向引物具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述第一探针具有SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，所述第二探针具有SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的用于检测乙肝病毒的双探针组合物，其特征在于，还包括内标探针，所述内标探针具有SEQ ID NO.5所示核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的用于检测乙肝病毒的双探针组合物，其特征在于，所述第一探针、第二探针和内标探针三者的两端均分别标记有荧光基团和淬灭基团，所述第一探针和第二探针两者的荧光基团与内标探针的荧光基团不同。

5.根据权利要求3所述的用于检测乙肝病毒的双探针组合物，其特征在于，所述正向引物、反向引物、第一探针、第二探针和内标探针的至少之一的核苷酸序列中的一个或多个胸腺嘧啶碱基替换为尿嘧啶碱基。

6.根据权利要求3所述的用于检测乙肝病毒的双探针组合物，其特征在于，所述第一探针、第二探针和/或内标探针的5’端和/或3’端增加多个碱基使其形成二级结构。

7.包括权利要求4所述的用于检测乙肝病毒组合物的用于检测乙肝病毒的试剂盒，其特征在于，还包括PCR缓冲液、dNTPs、Taq酶、UNG酶和核酸提取试剂。

8.权利要求7所述用于检测乙肝病毒试剂盒，其特征在于：所述引物、探针、PCR缓冲液、dNTPs、Taq酶、UNG酶混合并加入无DNase和RNase纯化水成为PCR反应预混液，所述PCR反应预混液的配方如下：

PCR缓冲液10μL；

100mM dNTPs(ATCGU)0.27-1.35μL；

50μM正向引物0.25-1.5μL；

50μM反向引物0.25-1.5μL；

50μM第一探针0.05-0.8μL；

50μM第二探针0.05-0.8μL；

50μM内标探针0.05-0.8μL；

Taq酶0.5-1μL；

UNG酶0.02-0.15μL；

加入无DNase和RNase纯化水至终体积20μL。

9.权利要求7所述用于检测乙肝病毒试剂盒，其特征在于：所述核酸提取试剂包括细胞裂解液450μL、磁珠混合液40μL、第一洗涤液500μL、第二洗涤液500μL和洗脱液30-120μL；

所述细胞裂解液包括2.5M异硫氰酸胍、10％曲拉通X100和15％异丙醇；

所述磁珠混合液包括超顺纳米磁性粒子、蛋白酶K、62.5copy/μL内标质粒和50％甘油；

所述第一洗涤液包括1M异硫氰酸胍和50％无水乙醇；

所述第二洗涤液包括TRIS/氯化钠和50％无水乙醇；

所述洗脱液为无DNase和RNase去离子水。