[发明专利]5-氨基乙酰丙酸合成酶突变体及其宿主细胞和应用

权利要求书

1.一种ALA合成酶，其特征在于：

(a) 所述ALA合成酶的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，但第40位的氨基酸残基为甘氨酸；

或

(b) 所述ALA合成酶的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，但第40位的氨基酸残基为甘氨酸，并且第75位氨基酸残基为丙氨酸。

2.编码权利要求1所述的ALA合成酶的核苷酸序列。

3.包含编码权利要求1所述的ALA合成酶的核苷酸序列的表达载体。

4.一种宿主细胞，所述宿主细胞含有权利要求1所述的ALA合成酶。

5. 如权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是大肠杆菌(Escherichia coli)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)、球形红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。

6.如权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是大肠杆菌或谷氨酸棒状杆菌。

7.权利要求1所述的ALA合成酶、或权利要求2所述的核苷酸序列、或权利要求3所述的表达载体、或权利要求4-5中任一项所述的宿主细胞在生产ALA中的应用。

8. 一种制备ALA的方法，所述方法包括以下步骤：

a. 培养权利要求4-6中任一项所述的宿主细胞，使之产生ALA；和

b. 任选从培养液中分离步骤a产生的ALA。

9. 一种制备ALA的方法，所述方法包括以下步骤：

a. 利用权利要求1所述的ALA合成酶，催化合成ALA；和

b. 任选从以上反应体系中分离ALA。

10.权利要求1所述的ALA合成酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：

a. 得到编码权利要求1所述的ALA合成酶的核苷酸序列；

b. 将a得到的核苷酸序列直接转染合适的宿主细胞或经载体引入合适的宿主细胞；

c. 培养b得到的宿主细胞；

d. 从步骤c得到的培养体系中分离所述宿主细胞产生的ALA合成酶。

11. 如权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述ALA合成酶的氨基酸序列如SEQID NO: 1所示，但第40位的氨基酸残基为甘氨酸。

12. 如权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述ALA合成酶的氨基酸序列如SEQID NO: 1所示，但第40位的氨基酸残基为甘氨酸，并且第75位氨基酸残基为丙氨酸。

13.如权利要求10-12中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括测定得到的ALA合成酶的活性以及解除血红素反馈抑制的能力。

14.改造ALA合成酶以便提高其活性的方法，所述方法包括以下步骤：

a. 改造编码所述待改造ALA合成酶的核苷酸序列，使得编码的氨基酸序列如SEQ IDNO: 1所示，但第40位的氨基酸残基为Gly；

或

如SEQ ID NO: 1所示，但第40位的氨基酸残基为Gly，并且第75位氨基酸残基为Ala；

b. 将a得到的核苷酸序列直接转染合适的宿主细胞或经载体引入合适的宿主细胞；

c. 培养b得到的宿主细胞；和

d. 从步骤c得到的培养体系中分离所述宿主细胞产生的ALA合成酶。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述方法还包括测定得到的ALA合成酶的活性以及解除血红素反馈抑制的能力。