[发明专利]一种适合Vero细胞生长的低血清培养基

说明书

本发明研制了一种适合Vero细胞生长的低血清培养基，将常规培养小牛血清用量由10％(V组分)降至2％，并且将常规添加的动物源成分替换成植物源成分和重组蛋白。该低血清培养基降低血清的用量，不但降低了成本，而且减小培养基中血清携带外源病原菌污染的可能，同时减少了血清中大量的杂蛋白，利于下游产品的分离纯化；用植物水解蛋白和重组表皮生长因子替代动物源的成分，降低动物源成分的副作用，提高了生物制品的安全性。本发明研制的培养基不但使Vero细胞生长良好，而且降低成本，减少外源病原菌污染，减少后期纯化工艺，提高细胞产品生产的稳定性，为以Vero细胞为病毒宿主或表达载体的生物制品的生产提供了一种优质的培养基。

技术领域

本发明涉及细胞无血清或低血清培养技术领域，具体是关于一种适合 Vero 细胞生长的低血清培养基，用于 Vero 细胞低血清培养及病毒的增殖。

背景技术

细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的生产疫苗的细胞系，它具有来源方便，生物安全性高，对多种病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高等优点。普通的 Vero 细胞培养基中使用终浓度 10％ ( 体积 ) 的小牛血清。但是血清所含的化学成分不确定，每个批次之间也存在着差异，同时血清的价格昂贵，还容易引起细菌、真菌、病毒和支原体污染；此外，血清中大量成分复杂的蛋白质会给疫苗、细胞因子和单克隆抗体等生物制品的分离纯化带来很大的困难，因此，尽量不用或少用血清成为 Vero 细胞培养的趋势。现有技术常通过添加牛血清白蛋白、转铁蛋白、胰岛素等动物源成分，来降低血清的量。但是动物源成分的蛋白质对生物制品 ( 如疫苗 ) 的安全性有很大影响。发明人研制出一种 Vero 细胞低血清培养基，既能够使细胞生长良好，形态正常，又减少了污染，提高细胞产品生产的稳定性，减少后期纯化工艺，降低生产成本。

发明内容

本发明旨在克服 Vero 细胞常规培养中必须使用高含量小牛血清才能促进生长、安全性差的缺点，提供一种新的低血清培养基。

这种培养基在 DMEM( 购自 HyClone 公司 ) 作为基础培养基的条件下，在原有10％小牛血清的基础上，将血清浓度降低到 2％，再在培养基中添加 2-10g/L 的大豆植物水解蛋白，20-100μg/L 的表皮生长因子，25-50nM 的亚硒酸钠，2-8mM 的谷氨酰胺，50-200μM 的柠檬酸铁，50-200μM 的维生素 C，150-300μM 的乙醇胺，β- 巯基乙醇 0-50μM，丙酮酸钠0.5-2mM。

与通过引入动物来源组分降低血清用量的培养方法相比，本发明研制的低血清培养基，引入的是植物源的蛋白质 - 大豆植物水解蛋白，重组表皮生长因子和一些化学合成物质。大豆植物水解蛋白是一种超滤、不含动物组分培养基添加物，它是由高度优化的消化过程生产而来的，在生产中使用了独特的混合酶，含有 15 种氨基酸成分。重组表皮生长因子和其他添加成分的来源明确，成分均一。使用这些成分替代动物源的成分能够促进 Vero细胞的生长。因此，本发明的 Vero 细胞低血清培养基不产生伴随蛋白成分的副作用，安全性好。本发明研制此，本发明的 Vero 细胞低血清培养基不产生伴随蛋白成分的副作用，安全性好。本发明研制的低血清培养基与常规培养的 10％小牛血清相比形态相似，减少了污染，有利于细胞下游产品的分离、安全性好；与商用的无血清培养基相比，降低了成本，适于用作生产疫苗等生物制品的病毒宿主、表达载体的培养。

附图说明

图 1 是具体实施方式二中与 10％小牛血清比较的 Vero 细胞培养 48 小时图片。

图2 是具体实施方式二中自制低血清培养基 Vero 细胞培养 48 小时图片。

图3 是具体实施方式二中与商用无血清相比Vero 细胞培养48 小时图片。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细描述：

实施例 1 ：